实验2 分离以尿素为氮源的微生物
1．实验原理 脲或称尿素，是 降解产物，有一些细菌含脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

在尿素固体培养基中加入 指示剂，如有含脲酶的细菌存在，这些细菌会向外分泌脲酶，使培养基中的尿素分解产生氨，导致培养基pH 升高，颜色变 。

可用______________固体培养基作为对照。

2．实验步骤
3．实验结果
4．讨论分析
·题组训练
1．下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是（ ）
A ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水
B ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水
C ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水、尿素
D ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、水、尿素
2．幽门螺杆菌（Hp ）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。

在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。

实验基本步骤如下：
(NH 2)2C=O+H 2O 脲酶 2NH 3+CO 2
请回答：
（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现色环带。

（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。

A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70％酒精浸泡 D．过滤
（3）步骤X表示。

在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。

菌液稀释的目的是为了获得菌落。

（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在中。

若不倒置培养，将导致。

（5）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_________分解为NH3和14CO2。

现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：
3．
（1）欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布个平板，通常以每个培养皿中有个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。

（2）接种后的培养皿于37 ℃的恒温箱中培养。

若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生氨，遇培养基中的产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。

（3）分离能利用尿素的细菌时所用的培养基成分上最主要的特点是。

（4）下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是（多选）（）
A．称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分 B．倒平板 C．涂布平板 D．微生物的培养
（5）与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因
是。

4．各种微生物对氧的需求是不同的，研究组开展了氧对微生物的影响实验，请回答下列问题：
(1)将含有LB固体培养基(刚配好，尚未凝固)的锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅，若在121 ℃条件下灭
菌，则灭菌时间一般为________min，灭菌时间从_________________开始。

灭完菌后将锥形瓶取出，待
温度下降到60 ℃(不烫手的温度)时，用______________擦拭桌面和双手，在超净工作台的___________ 旁将锥形瓶中的LB培养基分装到一系列试管中，并做标记。

(2)当试管温度下降到40 ℃(培养基还是液态)时，用灭菌过的移液器吸取0.1 mL的各类微生物悬液加
到相应试管中并封口，双手快速搓动试管，使菌种_______ ___于培养基内后迅速将封口的试管放置
在______ __条件下使培养基凝固。

(3)将上述试管放置于常温条件下培养
48小时后观察实验结果，下图中表示果酒
制作菌种的图是________。

实验2分离以尿素为氮源的微生物
1．蛋白质酚红红 LB全营养 2．99 玻璃刮刀 3．较多少量红
·题组训练
1．C
2．（1）脲酶红（2）D （3）接种涂布单（4）恒温培养箱无法形成单菌落（5）尿素3．（1）无菌水320（2）倒置红色环带酚红指示剂（3）以尿素作为唯一氮源（4）BC（5）土壤中能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数量
4．(1) 15 达到规定压力酒精棉酒精灯火焰 (2)均匀分布低温 (3) B。