3．操作条件差别
GC：加温操作
HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
二. 高效液相色谱法的特点和应用
“三高” “一快” “一广” 高压 高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC） 高灵敏度 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
三.各类高效液相色谱法

液-固吸附色谱 液-液分配色谱

3.1 液-固吸附色谱法
固定相为固体吸附剂,流动相为液体。

固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常 使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂

分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性 中心能力的差异，即物质吸附作用的不同来分离的。

适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具 有官能团的化合物和异构体有较高选择性
3.2 液-液分配色谱


固定相与流动相均为液体（互不相溶）；
基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相 ：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即 流动相的极性小于固定液的极性（正相色谱），反之， 流动相的极性大于固定液的极性（反相色谱）。正相 与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失较多，较少采 用；


离子交换色谱
离子色谱
排阻色谱
亲和色谱
高效液相色谱固定相和流动相 （－）固定相
1. 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两 大类：
刚性固体：以二氧化硅为基质，可承受 7.O×108 ～ 1.O×109Pa 的高压，可 制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官 能团，就是键合固定相。 硬胶：主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基 交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。
可以在线检测
1.2 HPLC与GC差别
1．分析对象
GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及
高聚物的样品不可检测 ,占有机物的20%.
HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性 和热稳定性的限制,分子量大、难气化、热稳 定性差及高分子和离子型样品均可检测.用途广范， 占有机物的80%。

相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测
主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
2.流动相差别
GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了 因素，对分离起很大作用,流动相种类较多，选择余地广,流动相极性和 pH值的选择也对分离起到重要作用,选用不同比例的两种或两种以上液 体作为流动相 ,可以增大分离选择性.
全多孔型固定相：

它由直径为 10nm 的硅胶微粒凝聚而成。也可由氧化铝微 粒凝聚成全多孔型固定相。 特点：颗粒很细（3～10μm），孔仍然较浅，传质速率快， 最大允许进样量比表面多空型固定相大，易实现高效、高 速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析

（二）流动相
由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲 和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选 择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的 要求是： (1) 高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂 的纯度 也要求高。 (2) 低粘度。使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于 分 离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。 粘度过于低的溶剂易在色谱柱或检测器内形成气 泡，影响分离. 一般溶剂沸点要高于55℃，以便降低 其挥发度
2. 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全 多孔型固定相两类
表面多孔型固定相：
它的基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多 孔活性材料，如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子 筛、聚酰胺等。 特点：多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰 迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易 ，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。 由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。
高效液相色谱法
(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)
一.
高效液相色谱法的产生和发展
performance liquid
高 效 , HPLC）是20世纪六十年代末在经典
液相色谱法（ LC ）的基础上引入了气相色谱（ GC ）的 理 论 和 技 术 ，采用高压泵、高效固定相以及高灵敏度 检测器发展而成的分离分析方法。


化学键合固定相 ：（将各种不同基团通过化学反应键 合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。 C-18柱（反相 柱）。
正相高效液相色谱

正相高效液相色谱是指以亲水性的填料作固定相 (如在 硅胶上键合羟基、氨基或氰基的极性固定相 )，以疏水 性溶剂或混合物作流动相(如己烷)的液相色谱。在液相 色谱发展的早期，类似于气相色谱把含羟基、氨基或 氰基的极性固定相涂渍在硅胶上这样容易被流动相冲 洗掉，现在几乎都使用键合固定相了。
固定相极性大 正相键合色谱法 流动相极性小 分析对象 硅胶-OH(或双-OH)，硅胶-CN 烃类+适量极性溶剂(CHCl3，CH3OH，CH3CN) 多用于极性或中等极性化合物的分离。还可用于分离 异构体、极性不同的化合物以及不同类型的化合物。

(3) 化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的
溶剂。也要避免流动相与固定相发生作用而使柱效下 降或损坏柱子。如使固定液溶解流失。

(4) 溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好 的选择性。
(5) 溶剂要与检测器匹配。 对于紫外吸收检测器，流动相不应有紫外吸收。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较 大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。
1.1 HPLC与经典LC区别

主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段
1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析
柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱）
高压输送流动相 柱效高 分析时间大大缩短