附录一染色液的配制
1、吕氏(Loefflev)美蓝染色液
A液:2%美蓝(Methylene blue)95%酒精溶液
B液:10%KOH溶液
取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。
2、石炭酸复红染色液
A液:4%碱性复红(basic fuchsin)95%酒精溶液
B液:5%石炭酸溶液
将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解、配成A液。
取A液10ml、B液90ml混合即可。
一般可将此溶液稀释5-10倍使用。
但稀释液易变质失效,一次不宜多配。
3、革兰氏(gram)染色液
(1)草酸铵结晶紫染液:
A液:1%结晶紫(Crystal violet)95%酒精溶液
B液:1%草酸铵(Ammonium oxalate)溶液
取A液20mlB液80ml,静置48/小时后使用。
(2)路哥氏(Lugol)碘液:
碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml
先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液另,待碘全部溶解后,加够水即成。
(3)95%酒精溶液
(4)沙黄(蕃红)复染液:
2.5%沙黄(Safranlne O)95%酒精溶液。
取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。
4、芽孢染色液
(1)5%孔雀绿(Malachite green)溶液。
(2)0.5%沙黄溶液。
5、荚膜染色液
将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,配成5%溶液,然后加入福尔马林(40%甲醛)0.5%(V/V)作防腐剂。
(2)沙黄染色液
与革兰氏染色液中的沙黄复染液相同。
6、鞭毛染色液
A液:单宁酸5.0g、FeC131.5g、蒸馏水100ml,福尔马林(15%)2.0ml、NaOH(1%)1.0ml。
配好后应当日使用,次日即效果差,第三日则不能使用。
B液:2%AgNO3溶液
待AgNO3溶解后,取出10ml备用。
向其余的90ml AgNO3中滴入浓NH4OH,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。
再将10ml德用的AgNOa溶液慢慢滴入。
此时会出理薄雾,轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3溶液直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。
如所呈雾不重,此染液可使用一周;如雾重,则银盐沉淀出,不宜使用。
7、乳酸石炭酸棉蓝染色液
石炭酸2.0g、甘油40ml、乳酸(密度1.21)20ml、蒸馏水20ml、棉蓝(Cotton blue)0.05g
石炭酸在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。
8、富尔根氏(Feulgen)核染色液
(1)Schiff氏试剂:将1g碱性复红加于200ml煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷却至50℃左右过滤。
加入1.0NHC120ml,摇匀。
待冷至25℃时,加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放于暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用)。
再用中性活性炭过滤,其滤液振荡1分钟后再过滤,滤液置于冷暗处备用。
注意:过滤需在避光条件下进行。
在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥,以消除还原性物质。
(2)Schandium 固定液
取50ml升汞水溶液加95%酒精25ml。
B液:冰醋酸
取A液9ml加B液1ml,混匀后加热至60℃。
(3)亚硫酸水溶液
10%偏重亚硫酸钢水溶液5ml、1MHC115ml、蒸馏水100ml。
9、Albert氏异染颗粒染色液
A液:甲苯胺蓝0.15g、孔雀绿0.2g、95%酒精2ml、蒸馏水
100ml先将甲苯胺蓝及孔雀绿溶解于酒精中,再加蒸馏水及冰醋,放置24小时,以滤纸过滤即可。
B液:先将碘化钾3g溶于10ml蒸馏水中,再加碘片2g,待溶解后,加蒸馏水至300ml。
10、Neiser氏异染颗粒染色液
A液:美蓝1g溶于95%酒精2ml后,加冰醋酸5ml及蒸馏水95ml,用滤纸过滤。
B液:斯麦褐0.2g溶于100℃蒸馏水100ml中,过滤。
11、Ponder氏异染颗粒染色液
甲苯胺蓝0.1g、一号天青0.1g、美蓝0.1g、95%酒精5ml、蒸馏水120ml、冰醋酸1ml。
12、苏丹黑-B染色液
苏丹黑-B(Sudan black B)0。
5g溶于100ml70%的酒精中。
13、苏丹Ⅲ染色液
苏丹Ⅲ(SudanⅢ)的95%酒精饱和液。
14、碘液(肝糖颗粒染色用)
碘片1g、碘化钾3g、蒸馏水100ml。
先将碘化钾溶于蒸馏水中,再加碘片溶解后即可。
15、石炭酸蕃红染色液
蕃红0.1kg溶于10ml95%酒精中,再加入30%石炭酸90ml。
16、酸性酒精
盐酸(密度1.19)3ml、95%酒精97ml。
17、0.1%美蓝染色液
吕氏美蓝染色液46 ml加蒸馏水54 ml。
18、F-5酸性坚膜定影液
水(52℃)600 ml、大苏打(硫代硫酸钠)240、亚硫酸钢15g、醋(28%)48ml、硼酸(硫酸铝钾)15g。
加冷水至1000 ml。
19、显影液。