当前位置:
文档之家› Nanodrop微量紫外分光光度计中文操作守则
Nanodrop微量紫外分光光度计中文操作守则
正确的液柱应为:
6、 不可使用含有 Hydrofluoric Acid (HF)之样品,其它无腐蚀性之液体皆可使用。
一、简介 NanoDrop 2000 超微量分光光度计是 NanoDrop 的最新产品,应用液体的表面张
力特性, 样品体积只需要 0.5~2ul,在侦测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、 高浓度、免石英管、免毛细管等耗材侦测吸收值的优点。它使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供 190~840nm 的全光谱侦测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感 度 CCD array 侦测器,侦测吸收值可高达 300Abs(dsDNA 浓度 2~15000ng/ul),大部分纯 化后的核酸几乎都不需要稀释即可侦测。 待测样品的均质性是 NanoDrop 2000 的最高要求,一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以 vortex mixer 震匀为最佳,若无 vortex mixer 也应以 pipette 吸放数次混匀。若担心 genomic DNA 可能因前述动作而断裂,则改以 55 ?C 加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态, 以确保 2ul 具有代表性。 侦测时选择不同侦测模式,可以得到最快速的结果: ● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm 吸收值(换算成 10mm 光径吸收值)、 260/280 ratio、260/230 ratio 及核酸浓度。 ● UV-Vis – 190~840nm 间所有波长的吸收值及光谱(以 1mm 光径吸收值呈现)。 ● A280 蛋白质定量法– 280nm 吸收值(换算成 10mm 光径吸收值)、260/280 ratio 及蛋 白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinction coefficient)方可计算。 ● BCA、Bradford 及 Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线 并计算 R square,待测蛋白质浓度。 * 蛋白质侦测模式目前提供 BCA、Bradford 及 Lowry 三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时 间 会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在最佳时间内完成侦测, 以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品,每个标准品最多可做五重复。 * 测蛋白质时样品体积需使用 2ul,每个样品侦测后需以 labwipe 擦拭 15~20 回,以避免 呈色剂与蛋白质的残留。 二、技术参数: 1、波长范围: 190-840nm; 2、波长精度: 1nm; 3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm); 4、其它: 1mm 光程长度(可自动调整到 0.05mm); 5、检测下限:2ng/μl(dsDNA); 6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA); 7、吸光率精确度:0.002 absorbance (1mm 光程); 8、吸光率准确性:2%(at 0.76 at 257 nm); 9、吸光率范围:0.02-300 (相当于 10mm 光程);
四、结果整理: NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处,若未指定,则档案会存在上一 个使用者的档案内。
NanoDrop 系列产品使用注意事项
1、待测样品的均质性是 NanoDrop 的最高要求,一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以 vortex mixer 震匀为最佳,若无 vortex mixer 也应以 pipette 吸放数次混匀。若担心 genomic DNA 可能因前述动作而断裂,则改以 55 ゚ C 加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态, 以确保 2ul 具有代表性
2、 侦测后立即使用拭镜纸(Kimwipe 类)擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走, 再将此 laboratory wipe 吸过样品的面反折到内部,折迭四次后以单方向多次擦拭台面(DNA 擦 5 次,Protein 擦 20 次)。
3、同一滴液体只能做一次侦测,欲重复定量同一样品,请擦掉前一滴,重新取出一滴 进行侦测。
10、核酸检测周期:< 5s; 11、体积:14cm×20cm。
三、使用方法举例: dsDNA:在主画面点选 Nucleic Acid,计算机与仪器自动完成联机。依照 DNA 所溶于之液 体准备该溶液(务必确认 DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一组 kit 的 elution buffer)取 出 1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再按 Blank。在右上方拉选 Sample Type 选 DNA-50, 在 Sample ID 位置输入样品名称,将样品混匀,取出 1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再 按 Measure。
4、基本上核酸样品可使用 1~2ul 做测量,随各液体体积特性之不同会有不同体积需求, 原则上不超过 2ul。并请使用 2ul pipette 避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质 样品因呈色剂与蛋白质本身特性,务必使用 2ul 进行侦测。
5、 当软件跳出错误讯息时,请详细阅读并依指示进行障碍排除。最常发生的情形是在 侦测过程液柱并未正确形成,软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上 下台面,或样品内有泡泡,将上臂拉起后,擦掉该滴样品,再重新进行侦测,必要时可将样 品体积加大至 2ul。
Nanodrop2000 独特的创新设计包括: 1、微量的样本检测体积-专利液体表面张力技术,仅需 0.5ul 的样本。 2、快速、简单的样本处理-大多数样本无需稀释,直接上样。 3、快速的检测时间-不到 5 秒钟即可得到完美的检测结果。 4、更宽广的光谱范围-190-840nm,可以测定低波长下的蛋白广吸收。 5、更高的样本浓度检测范围-检测上限高达 15,000ng/ul(dsDNA)