三、 黄酮类化合物的提取与分离
（三）碳粉吸附法
主要适于甙类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中， 分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液 无黄酮反应时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸 甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱，各部 分 洗 脱 液 进 行 定 性 检 查 （ 或 用 PPC 鉴 定 ） 。 通 过 对 Baptisia lecontei 中黄酮类化合物的研究证明，大 部分黄酮甙类可用7%酚/水洗下。洗脱液经减压蒸发浓 缩至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层 减压浓缩即得较纯的黄酮甙类成分。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
二、分离 现将较常用的方法介绍如下： （一）柱层析法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚
酰胺及纤维素粉等。此外，也有用氧化铝、氧化镁及 硅藻土等。
1. 硅胶柱层析：此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙 酰化）的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活 化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮 醇及其甙类等。
大多数黄酮甙元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对 多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等低极性溶剂 进行提取。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有： （一）溶剂萃取法
的。例如植 物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿 素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则 可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等 水溶性杂质。
第五章 黄酮类化合物 一、黄酮类化合物的概述 二、黄酮类化合物的性质 与颜色反应 三、黄酮类化合物的提取与分离
四、黄酮类化合物的波谱
三、 黄酮类化合物的提取与分离
（一）提取 黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），一般可用丙酮、
醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用沸水提取。在提取花青
素类化合物时，可加入少量酸（0.1%盐酸，应当慎用，避免发生水解）。
酸性： 7，4-二OH
7-或4-OH
（溶于）： 5%NaHCO3液 5%Na2CO3液
一般OH

5-OH
0.2%NaOH液
4%NaOH液）
三、 黄酮类化合物的提取与分离
（三）根据分子中某些特定官能团进行分离 在黄酮类成分的混合物中，具有邻二酚羟基成分与
三、 黄酮类化合物的提取与分离
有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常 用的溶剂系统有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到 分离甙和甙元或极性甙元与非极性甙元的效果。 （二）碱提取酸沉淀法
黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸 性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水 提取液中加入酸，黄酮甙类即可沉淀析出。此法简便 易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这个 方法。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
2. 聚酰胺柱层析：对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺
是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类
化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合
物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。
聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，
包括甙及甙元、查耳酮与二氢黄酮等
黄酮类
化合物从聚酰胺柱上洗脱时大体有下列规律：
三、 黄酮类化合物的提取与分离
在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓 度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮 母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解， 降低产品收率。
当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如 花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液 进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不 致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。
（1）甙元相同，洗脱先后顺序一般是：
参糖甙双糖甙单糖甙甙元
（2）母核上增加羟基，洗脱速度即相应减缓
三、 黄酮类化合物的提取与分离
（3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异 黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 （4）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，故查 耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。上述规律也适 用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的行为。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
兹以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍量 水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8~9，在此pH 条件下微沸20~30分钟，趁热油滤，残渣同上再加4倍 水煎1次，乘热抽滤。合并滤液在60~70℃下，用浓盐 酸调至pH为5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗 至中性，60℃干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，70~80℃ 干燥得芦丁纯品。
3. 葡聚糖疑胶(Sephadex gel)柱层析： 对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝
胶：Sephadex-G型及Sephadex-LH-20型。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是： 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类
化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。但分离 黄酮甙时，则分子筛的属性起主导作用。在洗脱时， 黄酮甙类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体， 葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有： (1) 碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），含盐水 溶液(0.5mol/L NaCl等)。 (2) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、t-丁 醇-甲醇(3:1)、乙醇等。 (3) 其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。
三、 黄酮类化合物的提取与分离
（二）梯度pH萃取法 梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮甙元的
分离。根据黄酮类甙元酚羟基数目及位置不同其酸性 强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如 乙 醚 ） 后 ， 依 次 用 5%NaHCO3 、 5%Na2CO3 、 0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离 的目的。