二、层析验证 1. 取9厘米培养皿一个，加入酚饱和水溶液约 厘米培养皿一个， 厘米培养皿一个 加入酚饱和水溶液约0.5cm高， 高 取圆形滤纸一张，在中心剪一直径约2mm的小孔，并以圆 的小孔， 取圆形滤纸一张，在中心剪一直径约 的小孔 心约1cm为半径划一圆作为底线。在此底线上，用铅笔点四 为半径划一圆作为底线。 心约 为半径划一圆作为底线 在此底线上， 铅笔点四 个等距离的原点并标明1， ， ， ； 个等距离的原点并标明 ，2，3，4； 2. 用毛细管分别吸取以上两种滤液及标准谷氨酸、丙氨 用毛细管分别吸取以上两种滤液及标准谷氨酸、 依次点在标明号码的原点处，点样2-3次 酸，依次点在标明号码的原点处，点样 次。注意斑点不 能太大，一般直径约0.2cm为宜。 为宜。 能太大，一般直径约 为宜 3.另取一条滤纸卷成实心筒状，直径约2~3mm,将此小筒 另取一条滤纸卷成实心筒状，直径约 另取一条滤纸卷成实心筒状 将此小筒 ），使层析滤纸通过 插入滤纸中心小孔（不可突出纸面之上）， 插入滤纸中心小孔（不可突出纸面之上），使层析滤纸通过 此小筒与酚溶液相连。 此小筒与酚溶液相连。然后将滤纸平放在盛饱和酚的培养皿 另取一大小相同的培养皿盖在滤纸上， 上。另取一大小相同的培养皿盖在滤纸上，此时酚溶液即由 滤纸中心孔向四周扩散。 滤纸中心孔向四周扩散。
三、计算公式
原点至斑点中心的距离/ Rf＝原点至斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离
思考题
1. 什么叫转氨作用？ 什么叫转氨作用？ 2. 根据所学理论阐明转氨作用在蛋白质的合成与分解及糖、 根据所学理论阐明转氨作用在蛋白质的合成与分解及糖、 脂肪代谢中有何作用？ 脂肪代谢中有何作用？
重要通知 下次实验课的安排 具体见公告栏
实验六 氨基转换作用
目的要求：了解转氨酶在代谢过程中的重要作用 目的要求：
学习应用纸层析法鉴定氨基转换反应
实验原理
体内α-氨基酸的 氨基在氨基转换酶的作 体内 氨基酸的α-氨基在氨基转换酶的作 氨基酸的 用下，移换至α-酮酸的过程 酮酸的过程， 用下，移换至 酮酸的过程，称氨基转换作 用。
转氨酶 (aminotransferase)
本实验是将谷氨酸与丙酮酸在肌肉糜中 谷氨酸－丙酮酸氨基转换酶（简称谷 谷氨酸－丙酮酸氨基转换酶（简称谷－丙转 氨酶）的作用下进行氨基转化反应， 氨酶）的作用下进行氨基转化反应，然后用 纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。 纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
ห้องสมุดไป่ตู้
谷丙转氨酶
L－谷氨酸
丙酮酸
α-酮戊二酸
L－丙氨酸
1
在反应体系中添加溴乙酸 以抑制谷氨酸和丙酮 在反应体系中添加 溴乙酸以抑制谷氨酸和丙酮 溴乙酸 酸的其他代谢过程。 酸的其他代谢过程。
谷氨酸、丙酮酸（丙酮酸羧化酶系）－－糖异生途径 谷氨酸、草酰乙酸在谷草转氨酶（GOT）催化转氨基生成天 冬氨酸。 丙酮酸：丙酮酸脱氢酶系催化生成乙酰辅酶A，进入TCA循 环。
4. 当酚溶液扩展到直径约 当酚溶液扩展到直径约 直径约7cm时，取出滤 时 铅笔画下酚溶液扩展边缘 画下酚溶液扩展边缘， 纸。用铅笔画下酚溶液扩展边缘，用吹风机 吹干。用喷雾器喷以0.1%茚三酮正丁醇溶液， 吹干。用喷雾器喷以 茚三酮正丁醇溶液， 茚三酮正丁醇溶液 再用热风吹干。用铅笔圈下各显色点。测定 再用热风吹干。用铅笔圈下各显色点。 各显色点的Rf 并解释之。 各显色点的 值，并解释之。 注意: 当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时， 注意 当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时， 对于一个化合物比移值Rf是一个特有的常数 对于一个化合物比移值 是一个特有的常数 。
试剂和器材 试剂 1%谷氨酸溶液（用1% KOH调到 中性）；1%丙酮酸钠溶液（用 1% KOH调到中性）； 0.1%KHCO3溶液；0.025％ 溴 醋酸溶液（用1% KOH调到中 性）；2% Hac溶液；0.1%标准 谷氨酸；0.1%标准丙氨酸。 展开剂：酚饱和水溶液：2份 酚加1份水混合放入分液漏斗， 振荡。静置24小时 显色剂：0.1%茚三酮正丁醇溶 液。
转换酶中的一类。催化氨基酸和a-酮酸 或 醛酸之间的氨基转换反应，生成与原来的a-酮 酸或醛酸相应的a-氨基酸或ω- 氨基酸，原来氨 基酸转变成相应的酮酸。转氨酶催化的反应都 是可逆的 。
转氨酶参与氨基酸的分解和合成，是人体代谢过程 中必不可少的“催化剂”； 以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为 重要。 GPT 主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中，在肝脏中 活力最大。GPT升高是肝脏功能出现问题的一个重 要指标。
材料 肌肉糜：取兔子肌肉1 肌肉糜：取兔子肌肉1g，置 研钵中， 研钵中，加0.9% 氯化钠溶 ml， 液3ml，在低温下研磨成细 离心5分钟（3000转 浆，离心5分钟（3000转/ 分），弃去沉淀，得肌肉糜 ），弃去沉淀， 弃去沉淀 提取液。 提取液。
操作方法
一、转氨酶作用 1、取试管2只编号（1、2），向每个试管各加 、取试管 只编号 只编号（ 、 ），向每个试管各加0.5mL 1%谷氨 ），向每个试管各加 谷氨 酸溶液,0.5mL 1%丙酮酸钠溶液 丙酮酸钠溶液,0.5mL 0.1% KHCO3和 酸溶液 丙酮酸钠溶液 和 0.25mL 0.025%溴醋酸 混匀。然后分别加入肌肉糜提取液 溴醋酸, 混匀。 溴醋酸 0.5ml，混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热 分钟做 ，混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热2-3分钟做 对照。用试管帽塞住另一只试管，置于45℃ 对照。用试管帽塞住另一只试管，置于 ℃水浴中 保温 40min。 。 2. 保温完毕，取出试管。向每只试管中各加 保温完毕，取出试管。向每只试管中各加2% HAc溶液 滴， 溶液4滴 溶液 再置于沸水浴中2min，使蛋白质完全沉淀。过滤收集滤液 再置于沸水浴中 ，使蛋白质完全沉淀。 待用。 待用。