厌氧菌
G+有芽胞
无芽胞
破伤风梭菌 产气荚膜梭菌
肉毒梭菌
艰难梭菌
G+
G-
双歧杆菌
消化Hale Waihona Puke 球菌脆弱类杆菌韦荣菌属
形
态
破伤风梭菌(C.tetani)革兰染色涂片：
菌体细长，芽胞正圆，比菌体粗，位 于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。
破伤风梭菌电镜图
产气荚膜梭菌荚 膜(体内易形成)： 产气荚膜梭菌(C.perfringens)革兰染色涂片：
实验七 厌氧性细菌
(anaerobic bacteria)
• 录像：无芽胞厌氧菌的感染 • 示教：
– 破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态．染色性及培养特 性 – Nagler反应 – 无芽胞厌氧菌的形态 （脆弱类杆菌．消化链球菌） – 厌氧培养方法
• 操作：
– 产气荚膜梭菌致病性试验 – 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）血清学反应
汹涌发酵：
stormy fermentation
Clostridium perfringens shows "stormy fermentation" of litmus milk. Acid turns the pH indicator litmus from blue to pink, acid and enzymes coagulate the proteins in the milk, and gas tears the curds apart.
→
剖腹→肝脏印
染色
涂片→自然干燥 →染液 →迅速水洗 →印干 →油镜检
厌氧培养方法
1.物理法：厌氧箱或厌氧缸。用物理方法将氧气吸走， 充入氮气、二氧化碳、氢气。
钯
2.化学法：氢气+氧气
水
3生物法：厌氧菌与需氧菌一起放入密闭空间培养。
肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续） 血清学反应
标本
选择鉴别培养基 (SS平板) 37℃ 24h
已知Ab检测 未知Ag (玻片 凝集试验)
双糖管等 血清学鉴定
生化反应
Nagler 反应
产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶(α毒素)，在蛋黄琼脂平板上， 卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂，生成的甘油二酯在菌落 周围形成乳白色混浊圈。当加入相应抗毒素后，卵磷脂 酶活性丧失，菌落周围不出现混浊圈。
产气荚膜梭菌致病性试验
培养液注入小鼠腹腔→ 断颈处死 片→石炭酸复红负染
37℃ 5-8h
菌体粗大，两端几乎平切。芽胞呈椭圆形， 位于次极端，不大于菌体，体外很少形成芽 胞。
培养特性
血平板 破伤风 梭菌 庖肉培养基 紫牛奶培养基
无明显改变
37℃ 48h，薄膜状爬 肉汤混浊，肉渣 行生长物，边缘不齐， 部分被消化，呈 伴轻度β 溶血 灰白色
产气荚 膜梭菌
菌落平整，光滑，边 分解肉渣中糖类 分解乳糖产酸，指 缘齐。有双层溶血环： 而产生大量气体。 示剂变黄，培养基 内层完全溶血(θ 毒素 凝固,产生大量气体, 引起)，外层不完全溶 呈蜂窝状,将液面凡 血(α 毒素引起) 士林上推,甚至冲走 管口棉筛。