微生物实验报告
几种常见酵母菌、霉菌的形态结构观察
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一、摘要
通过对酵母菌、霉菌形态结构观察，了解酵母菌、霉菌形态结构的形态结构知识。

实验结果为：
1、酵母菌一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬性。

菌落形态与细菌相似，但较大较厚，呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。

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二、实验目的
1、学习酵母菌、霉菌形态结构。

2、学习酵母菌、霉菌观察方法。

3、了解酵母菌、霉菌在实际中的意义。

三、实验原理
酵母菌：酵母菌多呈圆形、卵圆形，有的呈分支的菌丝状。

无性繁殖以出芽生殖为主，少数以分裂方式繁殖；有性生殖是通过不同遗传性的细胞接合产生子囊孢子的方式进行。

子囊孢子可用孔雀绿进行染色观察。

观察细胞形态和内部结构可采用染色的方法。

美蓝是无毒性的染料，新陈代谢旺盛的细胞具有较强的还原能力，使美蓝从蓝色的氧化型变成无色的还原型；而死亡细胞无此还原力，故被染成蓝色。

霉菌：霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝、气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍/高倍显微镜即可观察。

四、实验材料与仪器
1、菌种：产黄青霉、黑曲霉、黑根霉、总状毛霉、酿酒酵母、热带假丝酵母斜面菌种。

2、培养基：PDA培养基、0.05%美蓝染液、5%孔雀绿染液、半固体PDA培养基、乳酸苯酚固定液等。

3、仪器及用具：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、镊子、滴管、吸水纸等。

五、实验内容和步骤
酵母菌形态观察
1、酵母菌活体观察及死亡率的鉴定
（1）取酿酒酵母PDA斜面，以无菌水洗下菌苔制成菌悬液。

（2）取洁净载玻片一张，滴加0.05%美蓝染液1滴于载玻片中央，用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2-3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态。

（3）在一个视野里计数死亡细胞与活细胞，共计数5-6个视野。

酵母菌死亡率一般用百分数来表示，以下式来计算：
死亡率= 死亡细胞总数×100%
死活细胞总数
2、酵母菌子囊孢子的观察
从产孢子培养基上挑取少量菌苔于载玻片的水滴中，经过涂片、干燥和热固定后，加数滴孔雀绿染液，染色1min，水洗去孔雀绿染液；加95%乙醇脱色30s，水洗去乙醇溶液；最后用沙黄染色液复染30s，水洗去沙黄染色液，用吸水纸吸去载玻片上的水分；待制片干燥后镜检。

子囊孢子为绿色，子囊为粉红色。

2、假菌丝的培养与观察
在28℃培养2-3d的假丝酵母PDA培养基中，挑取少量菌苔，放在载玻片上滴一滴清水，制成悬浊液；在空气中自然干燥或置于火焰上方，使酵母菌固定；在高倍显微镜下观察，牙殖酵母可形成藕节状假菌丝，裂殖酵母形成竹节状假菌丝。

霉菌形态观察
1、黑根霉主要观察它的孢囊孢子和假根，取少量黑根霉制成悬浊液，在高倍显微镜下观察；
2、黑曲霉的观察方法同黑根霉，主要观察黑曲霉的分生孢子和足细胞；
3、青霉的观察做法同上，观察的是青霉的产孢结构—分生孢子梗；
4、取少量总状毛霉菌苔，在载玻片上加一滴乳酸苯酚油，盖上盖玻片，主要观察的是总状毛霉的孢囊孢子及假根。

六、实验结果与讨论
1、酵母菌死亡率的计算。

（如图1）
细胞是不被着色的代谢旺盛的活细胞，还有少数为被染成淡蓝色的衰老细胞。

这五组实验数据的死亡率有三组数据超过50%，说明大部分细胞是死细胞，少数细胞是活细胞或衰老细胞。

造成这一实验结果的可能原因是染色时间过长，导致细胞大部分死亡，从而被染成蓝色细胞。

酵母菌一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬性。

菌落形态与细菌相似，但较大较厚，呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。

2、通过对酿酒酵母的活体观察可以看到酵母细胞的球形结构以及其出芽生殖产生的孢子，
还有其形成的子囊孢子，在盖玻片的挤压下，只能看到三个孢子，实则为四个子囊孢子。

3、酵母菌子囊孢子为绿色，子囊为粉红色。

（见图2 ）
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图1酵母菌活体染色图图2 酵母菌子囊孢子图3 青霉
图4根霉图5 曲霉图6 毛霉
七、讨论与分析
1、取菌时，可能取菌数量过多，叠在一起导致观察效果差。

2、我们在进行染色的过程中，多次用染液和水进行冲洗，大部分菌丝估计已脱落，所以无法观察到。

八、参考文献
《微生物学实验指导》（第2版）黄秀梨辛明秀高等教育出版社。