添加剂对水溶液中丹参酚酸B稳定性的影响曲桂武1 岳喜典2李桂生1（1.山东省天然药物工程技术研究中心，山东烟台 264003；2. 中国海洋大学，山东青岛 266003）摘要：目的考察不同添加剂对水溶液中丹参酚酸B稳定性的影响。
方法向丹参酚酸B 水溶液中加入不同添加剂，80℃水浴保存72小时，高效液相色谱法检测溶液中丹参酚酸B 含量的变化。
结果以偏重亚硫酸钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸盐酸盐和亚硫酸氢钠作添加剂的水溶液经80℃水浴72小时丹参酚酸B含量下降≤5%，EDTA-2Na、硫代硫酸钠、亚硫酸钠效果较差。
结论抗坏血酸对水溶液中丹参酚酸B有显著的保护作用。
关键词：丹参酚酸B；药物稳定性；偏重亚硫酸钠；抗坏血酸；L-半胱氨酸盐酸盐；亚硫酸氢钠；EDTA-2Na；硫代硫酸钠；亚硫酸钠The effect of additives on the stability of salvianolic acid B in water solutionQU Gui-wu1, YUE Xi-dian2, LI Gui-sheng1(1. Shandong Engineering Research Center for Natural Drugs, Yantai, Shandong, 264003, China;2. Ocean University of China, Qingdao, Shandong, 266003, China)Abstract: Object To study the effect of different additives on the stability of salvianolic acid B in solution. Method Different additives were added to salvianolic acid B in water solution and water bath for 72hrs at 80℃, determined the content of salvianolic acid B by HPLC. Results The decrements of salvianolic acid B in solution with Na2S2O5, Vc, L-cysteine hydrochloride and sodium bisulphate were less than 5% while in solution with EDTA-2Na, sodium hyposulfite and sodium sulfite were more than 10%. Conclusion Vc has the best protective action on salvianolic acid B in water solution than others.Key words: salvianolic acid B; stability of drug; Na2S2O5; Vc; L-cysteine hydrochloride; EDTA-2Na; sodium hyposulfite; sodium sulfite丹参酚酸B是唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.中主要的水溶性成分，具有抗心肌缺血缺氧[1]、改善血液流变性[2]等多种药理活性。
其化学组成是二分子丹参素与一分子原紫草酸缩合而成的四聚咖啡酸类化合物(图1)。
OHHOOHO COOCOOHOHOHC OOHOHOHOFig.1 The chemical structural formula of Salvianolic Acid B丹参酚酸B化学性质很不稳定，实验中发现水溶液中的丹参酚酸B在低浓度下(<0.1mg/mL)室温过夜损失接近30%，其分解产物为丹参素、原儿茶醛等。
大多数丹参制剂均采用丹参酚酸B的分解产物丹参素和原儿茶醛作为主要有效成分或质量检测指标，但丹参酚酸B分解过程尚存在诸多不确定因素，使制剂质量的均一性难以得到保证，因此目前人们越来越倾向于直接以丹参酚酸B 作为制剂的主要有效成分和质量检测指标。
以丹参酚酸B 为主要成分的制剂工艺研究中首先需要解决的是如何保持其在溶液中稳定性的问题。
常用方法有加入抗氧剂、络合剂等添加剂和调节溶液pH 等。
本文在添加剂的筛选方面进行了初步探索。
1 仪器与试剂Agilent 1100 型高效液相色谱仪(包括一元泵、柱温箱、手动进样器、VWD 检测器、HP-ChemStation)，恒温水浴锅（上海跃进医药设备厂）；丹参酚酸B 对照品(山东省天然药物工程技术研究中心现代中药室制备，经UV 、IR 、1H-NMR 和13C-NMR 鉴定并确认结构, 纯度>98% )，纯度在85%以上的丹参酚酸B 样品（山东省天然药物工程技术研究中心现代中药室制备）；甲醇(色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司)，冰醋酸（分析纯，盐城益林化工厂），实验中所用水为去离子水。
2 方法与结果２．１ 实验设计 取常用抗氧剂硫代硫酸钠、偏重亚硫酸钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸盐酸盐、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、络合剂EDTA-2Na ，按0.1%(g/mL)的终浓度加入到丹参酚酸B 水溶液中，80℃水浴保温，连续三天每隔24小时取样用高效液相色谱法检测溶液中丹参酚酸B 的量，考察溶液中丹参酚酸B 的含量变化情况。
２．２ 标准曲线的绘制 色谱柱：Discovery C18 (4.6mm ×25cm ，5μm)；柱温：25℃；进样量：20μL ；流动相：甲醇-水-冰醋酸(40:60:2，V/V)，检测波长286nm ，流速0.5mL/min ，理论塔板数以丹参酚酸B 计不低于4000。
精密称取丹参酚酸B 对照品25mg ，置25mL 棕色容量瓶中，加水溶解并定溶至刻度，摇匀，作为丹参酚酸B 对照品溶液。
精密量取０．０１、０．０５、０．１０、０．５０、１．００和５．００ｍＬ于１０ｍＬ棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
依次吸取丹参酚酸Ｂ系列对照品溶液２０μL ， 注入液相色谱仪， 测定， 以丹参酚酸Ｂ的峰面积为纵坐标， 浓度为横坐标， 计算得回归方程为Ｙ＝６３２６０Ｘ＋４４４．２５，ｒ＝０．９９９６，表明丹参酚酸Ｂ在０．００１～１ｍｇ／ｍＬ之间线性关系良好。
P e a k A r e aConcentration of Salvianolic Acid B(mg/mL)Ｆｉｇ．１ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｃｕｒｖｅ ｏｆ Salvianolic Acid B 2.3 供试品溶液的制备精确称取山东省天然药物工程技术研究中心现代中药室制备的丹参酚酸B 样品100mg ，置250mL 容量瓶中，加水溶解并定容至满刻度后摇匀，取160mL ，均分成8份，其中7份中分别加入上述不同添加剂0.02g ，使其终浓度为0.1%，溶解摇匀，另一份不加任何添加剂作为空白对照。
每份分装成四支5mL 的西林瓶中，压铝盖密封，于80℃水浴保温，分别在0、24h 、48h 、72h 各取一支室温放冷后作为供试液，按上述色谱条件检测溶液中丹参酚酸B 的量。
2.4 检测结果加入不同添加剂的丹参酚酸B 溶液80℃水浴保温72h 后，丹参酚酸B 的含量变化见表1。
Tab.1 The d ecrements of s alvianolic a cid B in water s olution with d ifferent a dditives 溶液中丹参酚酸B 的含量(mg/mL)添加剂0h24h 48h 72h 保温72h 后丹参酚酸B 的变化率(%) 硫代硫酸钠 0.32 0.31 0.31 -22.50 偏重亚硫酸钠 0.39 0.39 0.38 -5.00 抗坏血酸 0.41 0.40 0.40 0.00 L-半胱氨酸盐酸盐 0.40 0.39 0.38 -5.00 亚硫酸氢钠 0.39 0.39 0.38 -5.00 亚硫酸钠 0.32 0.31 0.30 -25.00 EDTA-2Na 0.40 0.39 0.35 -12.50 空白0.400.310.290.26-35.002.5 结论从检测结果看，本文所用添加剂或多或少都对溶液中的丹参酚酸B 有保护作用，酸性抗氧剂偏重亚硫酸钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸盐酸盐和亚硫酸氢钠效果明显，酚酸B 降低程度不大于5%，其中又以抗坏血酸为最佳，80℃水浴保温72h 后，丹参酚酸B 的含量未见明显变化。
络合剂EDTA-2Na 效果稍差一些，而碱性抗氧剂硫代硫酸钠和亚硫酸钠效果最差。
3 讨论由于丹参酚酸B 的化学稳定性差，所以多以镁盐形式做成固体制剂用于临床，尚未见有液体制剂的报道，目前丹参的液体制剂多以丹参酚酸B 的分解产物丹参素或原儿茶醛作为主要有效成分。
因此弄清影响丹参酚酸B 稳定性的各种因素，不但有助于探索研制丹参酚酸B 液体制剂的新方向，而且对目前以丹参素、原儿茶醛为主成分的丹参制剂的工艺改进和质量控制也具有重大参考价值。
上述不同添加剂在实际应用中的用量并不尽相同，本实验中为了便于做出定性判断，均采用0.1%的加入量，结果显示了一个明显的趋势，即酸性添加剂对溶液中丹参酚酸B 的保护作用明显好于碱性或中性添加剂，这说明加入添加剂后引起的pH 环境的改变对丹参酚酸B 的稳定性也具有重要作用。
关于pH 对水溶液中丹参酚酸B 的稳定性影响见与本文有关的另一论文《丹参酚酸B 在水溶液中的稳定性研究》（待发）。
参考文献：[1] 郭利平，高秀梅，张萌，等.丹酚酸B 预处理的心脏微血管内皮细胞延迟保护作用研究[J].天津中医，2002,19(1):41[2] 孙莉莎，吴航宇，徐江平，等.丹酚酸B对家兔血液流变性的影响[J]. 微循环学杂志,2003,13(1):19～20。