概述
生物标记物(Biomarker)是近年来随着免疫学、分子生物 学和基因组学技术的发展而提出的一类与细胞生长、增殖、 疾病发生等有关的标志物。生物标志物能反映正常生理过程 或病理过程或对治疗干预的药物反应，在早期诊断、疾病预 防、药物靶点确定、药物反应以及其他方面发挥作用。寻找 和发现有价值的生物标记物已经成为目前肿瘤领域研究的一 个重要热点。
科学问题： 耐药的分子模式尚未明确 研究方法： ARMS检测技术结合ddPCR技术
研究目的: 非小细胞肺癌EGFR突变阳性患者经TKI治疗失 败后，观察： 血浆游离肿瘤DNA中T790M突变频率及丰度 不同进展模式下突变频率及丰度的差异
ctDNA检测
研究方案
筛选入组
• 男性或女性患者 （>18岁）
假阳性 1%; 假阴 性56.9% 97.3%
88%
与预后的相关性
外周血EGFR突变 预示对TKI良好的 ORR与PFS 外周血EGFR突变 与不良的预后有关
外周血EGFR突变 患者与ORR/PFS显 著相关 TKI治疗进展时 44%伴有耐药突变
血浆EGFR突变是 生存结果的有力预 测因素
ctDNA检测 外周血检测EGFR突变与TKI治疗疗效
靶人群
靶向目的 基因药物
延长有效率 延长生存 改善生活质量
临床获益
概述
基于临床分期的经典NSCLC治疗方案
Ⅰ期（IA - IB）：
手术，IA不需要辅 助化疗，IB有高期：
手术+手术后辅助 化疗
III期：
手术、放疗及化疗 相结合的多学科综
合治疗
IV期：
药物治疗为主，如 有EGFR突变或ALK （+）患者，优先
但灵敏度从43-100%不一 尚有提升的空间
对现有方法的进一步优化, 探索高灵敏度 的检测方法, 以提高血液检测的灵敏度
积累前瞻性的临床研究数据,以进一步推 动血液检测在临床的应用
实现动态实时血液活检, 更好预测疗效或 耐药是方向
二、CD-DST技术（胶滴肿瘤药敏检测技术）
传统化疗的困境与挑战 经验性多药联合方案，方案的合理、有效性无法预见。 同病不同治、同人不同治如何判定？ 在取得疗效的同时，如何避免或减轻副作用？ 成本和疗益相关性不好，加重国家和个人经济负担。
血液样 本 血浆 血清
血清 血浆 血浆
检测方 法 DHPLC
PCR
DxS ARMS EGFR array Cobas
外周血 突变率 34.3% 59.1%
23.7% 90.2% 33.6%
肿瘤组 织突变 率 33.5%
100%
61.5%
86.5%
43.7%
突变阳性 检出一致 性 79.7%
59.1%
ctDNA检测
组织与血液配对标本EGFR突变的研究回顾
研究项目 情况
Bai etal
Rosell SLCG 研 究 2009 NEJM IPASS 2012 JTO
Yam 2012 JTO
FASTACT 2015 CCR
样本量
230
164
194(91 例有肿瘤 组织) 51(37例 有肿瘤组 织) 238配对 样本
• 组织或细胞学确诊 NSCLC
• TKI治疗前为IIIB-IV期 • TKI治疗有效后出现
PD（符合Jackman耐 药标准）
N＝300
入组后处理
取外周血5ml X 4管
T790M突变检测
ARMS法检测 ddPCR法检测
• 收集患者临床病理资 料
• 记录肿瘤不同进展模 式 – 无症状疾病进展 – 有症状疾病进展 a) 胸内局部进展 b) 颅内进展 c) 其它进展
外周血（DHPLC）检测与 组织检测EGFR突变及其与 TKI靶向药物治疗的疗效
Bai , et al. J.Clin.Oncol:2009
外周血（ARMS）检测与组 织检测EGFR突变及其与TKI 靶向药物治疗的疗效
Mok T, et al. 2013 Lancet Oncology
Overall Survival
考虑靶向治疗
概述 驱动基因分型成就NSCLC个体化精准治疗
肺癌分期从组织分型到分子分型 的变革，以EGFR突变为代表的TKI 治疗是靶向治疗前驱与典范 易瑞沙对EGFR突变患者受益率达 71.2%，效果明显优于化疗，对无 突变患者受益率仅为1.1%
Li TH et al. J Clin Oncol 2013 31 1039-1049
结果分析
数据分析
➢ 主要指标：观察TKI治疗失败后患者血浆游离肿瘤DNA中T790M突变频率及丰 度，并比较不同进展模式下突变频率及丰度的差异
➢ 次要指标：评估T790M突变频率及丰度与患者临床病理特征的相关性
ctDNA检测
ctDNA检测
小 结 (1)
现有方法血液检测特异性90%以上 假阳性率低
一、ctDNA检测技术 作为金标准的组织靶基因检测亦存在局限性
ctDNA检测 外周血中游离肿瘤DNA的来源
➢患 者 血 浆中的游离 DNA 大约 是正常人的10倍 ➢ctDNA (Circulating Tumor DNA )主要由凋亡和坏死的肿瘤 细胞产生，以及肿瘤细胞分泌的 外排物，其遗传学特性与肿瘤基 因组DNA相似
• 针对VEGFR-2的有雷 莫芦单抗
(ramucirumab)；针对 Her-2通路的有赫赛汀。
胃癌的靶 向治疗
肠癌的靶 向治疗
• 针对EGFR通路的有 西妥西单抗；针对
VEGF的有贝伐单抗。
概述 靶基因检测是实现精准个体化治疗的关键
敏感高效的 驱动基因检测
靶向治疗：有明确的靶向目的基 因的药物、靶人群及有效的检测 方法。而准确的检测是实现精准 治疗的基础与关键
概述
基于分子标志物的肿瘤靶向治疗
• EGFR突变患者给予 EGFR TKI治疗；ALK （+）、ROS1（+） 患者，给予克唑替尼 治疗。针对微环境的 有抗血管生存治疗， 贝划单抗联合化疗一 线用于晚期肺腺癌患 者。
非小细胞 肺癌的靶 向治疗
乳腺癌的 靶向治疗
• 针对Her-2通路的有赫 赛汀；针对HER2和 HER1通路的有拉帕替 尼。
ctDNA检测 ARMS技术：血液ctDNA基因检测
ctDNA检测
非小细胞肺癌EGFR突变阳性患者经TKI治 疗失败后血浆游离肿瘤DNA中T790M突
变频率及丰度的前瞻性观察研究
多中心研究 PI: 马胜林教授 研究发起方：杭州市第一人民医院集团
ctDNA检测
TKI治疗失败的不同临床模式下的耐药分子模型