2014年全县兽医实验室技能培训实施方案一、目的为进一步提高各乡站动物防疫人员技能水平，切实做好疫病监测和样品采集工作，畜牧兽医局决定于9月4－11日举办全县兽医实验室技能培训会，现将有关事宜安排如下：二、时间、地点及人员分组1.培训地点：县疫控中心实验室。
2.时间及分组：本次培训共分2组。
第一组：崔建文、柳红红、谢瑞瑞、杨刚、苏剑辉、郑薇、崔高栋、陈渊博、程云飞、王军。
第二组：李宝瑞、王映霞、张钰钰、李红艳（通化）、李红艳（良邑）、王具荣、张军维、李爱萍、李丽霞，每组3天。
3.日程安排：见附件1动物防疫技能培训日程安排。
三、培训内容1.猪耳静脉采血2.猪前腔静脉采血3.鸡翅静脉采血4鸡心脏采血5.鸡的剖检及采样6.血清分离7.血涂片、组织触片、粪便涂片制作8.染色镜检。
四、培训要求1.各站参训人员自备工作服，带手术刀、手术剪、镊子各1把，酒精灯一个（不装酒精），全新载玻片盖玻片各10张。
2.住宿：由培训人员在县内自找宾馆住宿，所属乡站按《关于印发庄浪县党政机关和事业单位差旅费管理办法的通知》（庄政发…2008‟32号）每人每天按50元的标准凭票实报实销，在朋友、亲戚或回家住宿的不予报销。
3.餐饮：由培训人员自行解决，所属乡站按《关于印发庄浪县党政机关和事业单位差旅费管理办法的通知》（庄政发…2008‟32号）每人每天补助伙食和公杂费15元的标准报销。
4.防护及采血用具防疫物资库负责整理（培训用物资计划单见附件2）。
5.剖检及采样用具由实验室负责准备（见附件2）。
6.培训期间严格考勤签到制度，每天上午8∶30～12∶00、下午14∶30～17∶30为培训时间，无特殊情况不得随意迟到、早退、旷课。
五、考试操作部分培训现场附带考核，培训结束后组织理论考试，总成绩由操作和理论两部分组成，对总成绩不合格者，继续学习，直到合格为止。
附件1：动物防疫技能培训日程安排组别日期时间地点项目主持人备注第一组9月4日8∶30-9∶504楼会议室开班仪式牛主任10∶10-12∶004楼会议室理论讲解、观看影像资料。
魏军王建明14∶30-17∶30畜牧兽医局鸡翅静脉采血、鸡心脏采血、血涂片的制作。
孙容非王建明王军9月5日8∶30-11∶30畜牧兽医局鸡的剖检及采样、组织触片的制作。
魏军孙容非王建明14∶30-17∶303楼会议室血清分离、血涂片、组织触片的染色镜检。
魏军孙容非王建明第二组9月9日8∶30-9∶504楼会议室开班仪式牛主任10∶10-12∶004楼会议室理论讲解、观看影像资料。
魏军王建明14∶30-17∶30畜牧兽医局鸡翅静脉采血、鸡心脏采血、血涂片的制作。
孙容非王建明王军9月10日8∶30-11∶30畜牧兽医局鸡的剖检及采样、组织触片的制作。
魏军孙容非王建明14∶30-17∶303楼会议室血清分离、血涂片、组织触片的染色镜检。
魏军孙容非王建明两组全部9月11日8∶30-11∶30良邑猪场猪耳静脉、前腔静脉采血。
孙容非王建明王军14∶30～17∶303楼会议室理论考试魏军、孙容非、王建明附件2： 培训用物资计划单名 称数 量备 注捕猪器 4 按猪的数量确定由物资库准备一次性手套 2盒（100双）脚套 25双注射器（10ml ） 200支 注射器（5ml ）100 显微镜 4 一次性口罩 100只 由实验室准备头帽 25只 真空采血管 100支 指型管 38个 载玻片 38个 染液 2种各1套香柏油 1瓶 擦镜纸 数张 二甲苯 1小瓶 手术刀、剪、镊子 1套 碘酒棉球、酒精棉球干棉球各1瓶 采样登记表 19份 95%酒精 5瓶 县内采购猪 鸡 12只带线插电板 3个(三脚)满足4～6个显微镜附件3：兽医实验室技能操作要点及规范1.鸡翅静脉采血侧卧保定，展开翅膀，露出腋窝部，拔掉羽毛，在翅下静脉处消毒。
用碘伏做点状螺旋式消毒。
拇指压迫近心端，待血管怒张后，用采血器针头平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓缓抽取血液，采血量不少于2mL。
采血完毕及时用干棉球压迫采血处止血，避免形成淤血块。
2.鸡心脏采血2.1操作步骤2.1.1雏鸡心脏采血：选定采血部位用碘伏做点状螺旋式消毒；一手抓鸡，一手持采血器，平行颈椎从胸腔前口插入，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血器，采血量不少于2mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。
2.1.2成年鸡心脏采血：取侧卧或仰卧保定。
侧卧保定采血，助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒（用碘伏做点状螺旋式消毒），垂直或稍向前方刺入2～3cm，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血器，采血量不少于2mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。
仰卧保定采血，胸骨朝上，用手指压迫嗉囊，露出胸前口，消毒术部（用碘伏做点状螺旋式消毒），用装有长针头的采血器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平刺入心脏，采血量不少于2mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。
2.2注意事项确定心脏部位，切忌将针头刺入肺脏。
顺着心脏的跳动频率抽取血液，切忌抽血过快。
3.鸡体解剖与采样3.1操作步骤将鸡不放血致死；将处死鸡浸于消毒液中使羽毛浸湿，洗去尘垢、污物；先将腹壁和大腿内侧的皮肤切开，用力将大腿按下，使髋关节脱臼，将两大腿向外展开，从而固定尸体；于胸骨末端后方将皮肤横切，与两侧大腿的竖切口连接，然后将胸骨末端后方的皮肤拉起，向前用力剥离到头部，使整个胸腹及颈部的皮下组织和肌肉充分暴露；在胸骨后腹部横切穿透腹壁，从腹壁两侧沿肋骨头关节处向前方剪断肋骨和胸肌，然后握住胸骨用力向上向前翻拉，露出体腔；对剪刀和镊子消毒，采集肺脏（单侧、2/3以上）；对剪刀和镊子消毒，采集肝脏（不带胆囊的一叶）；对剪刀和镊子消毒，采集脾脏；对剪刀和镊子消毒，采集肾脏（单侧、2/3以上）；从口腔下剪，剪开颈部皮肤肌肉，使喉头暴露；对剪刀和镊子消毒，采集喉头、气管；剪开头部皮肤，打开头骨；对剪刀和镊子消毒，采集脑组织（1/3以上）。
3.2注意事项采集样品时剪刀和镊子的消毒采用火焰消毒法，采集的组织分别放入事先准备的器皿中。
4.猪前腔静脉采血4.1站立保定采血操作步骤将保定绳套在猪嘴上，拉紧另一端，使猪的头颈与水平面呈30°以上角度，偏向一侧。
选择颈部最低凹处，用碘伏做点状螺旋式消毒，使针头偏向气管约15°方向下针，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血器，采集血液5mL。
4.2仰卧保定采血操作步骤把前肢向后方拉直；选取胸骨端与耳基部的连线上胸骨端旁2cm的凹陷处，用碘伏做点状螺旋式消毒；用采血器刺入消毒部位，针刺方向为向后内方与地面呈60°角刺入2～3cm，当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血液进入采血器内，采血量不少于５mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。
5.猪耳静脉采血站立保定，耳静脉局部常规消毒，1人用手指捏压耳根后静脉血管处使静脉充盈、怒张，术者用左手把持耳尖，右手持采血器使针头与皮肤呈30°～40°刺入血管，轻回抽如见回血证明已刺入血管，再将针头沿血管稍向前伸入，抽取血液，抽完压迫止血。
6.血涂片、组织触片、粪便涂片的制作：6.1取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取血液少许，在另一张洁净的玻片上，以45°角均匀推成一薄层涂面。
6.2以无菌剪刀、镊子剪取被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印。
6.3在干净玻片上滴几滴水，用火柴棍挑少量粪便加入其中，夹去较大的粪渣，混匀，使玻片上的粪液成一薄层，以能辨清玻片下面的报纸字迹为宜，在液膜上盖上干净盖玻片，镜检。
7.标本片的干燥固定7.1干燥，部分表本片应在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，在火焰高处微烤加热干燥。
7.2固定，固定因染色方法不同而异。
7.2.1火焰固定。
将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
7.2.2化学固定用姬姆萨染色时要用甲醇固定3-5min。
8.革兰氏染色8.1初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约2-3min，水洗。
8.2 媒染（助染）：用滴管碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1-3min，水洗。
8.3 脱色：斜臵载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。
8.4 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min，水洗。
8.5干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后臵显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴香柏油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。
9.美兰染色经火焰固定的抹片上滴加适量美兰染液覆盖涂面，染色2-3min,水洗，晾干或吸干，镜检。
菌体呈蓝色。
10.瑞氏染色抹片自然干燥后，滴加瑞氏染液于涂片上以固定标本，1-3min后，再加与染色液等量的磷酸盐缓冲液，轻轻摇晃使与染色液混合均匀，5min左右水洗，干燥后镜检，菌体成蓝色，组织细胞的细胞质呈红色，细胞核呈蓝色。
11.血清的分离11.1无菌采血。
11.2采血后室温（37℃更好）静臵1-2小时，再4℃（冰箱冷藏）静臵8-12小时（斜放，增加析出面积）。
11.3取上清液11.4以上方法无法自然析出的离心(1500r/min),10分钟，分装。
11.5不能及时送检的可臵于4℃环境（冰箱冷藏）保存2-3天。
超过3天的冷冻保存。
11.6送检时认真填写采样登记表（如：猪O型口蹄疫用的多肽苗还是灭活苗一定要写清楚，不要写“口蹄疫”、“猪瘟”）11.7分装时尽量用无菌干净的试管，真空管最好。