细胞生物学实验报告
一、细胞形态观察及其大小测量
1.实验结果及分析
（1）细胞形态观察
图1.1 10X40倍镜下肝细胞图1.2 10X40倍镜下血细胞
图1.3 棉花叶横切（栅栏组织细胞）
（2）细胞大小测量
项目原始数值及数据处理平均值
台尺41 35 41 28 20 33 目尺170 145 170 116 83 136.8
根据公式计算得：每
2.412 2.414 2.412 2.414 2.410 2.412
格μm数
项目原始数据及数据处理平均值长格数28 28 29 29 31 28 26 23 25 27.44 宽格数 5 4 5 4 6 4 5 5 4 4.67 长μm 67.54 67.54 69.95 69.95 74.77 67.54 62.71 55.48 60.30 66.20
2.思考题
（1）血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。

绘图。

血细胞分为红细胞、白细胞和血小板。

红细胞：主要的功能是运送氧。

白细胞：主要扮演了免疫的角色。

当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。

血小板：止血过程中起着重要作用。

血细胞约占血液容积的45%，包括红细胞、白细胞和血小板。

在正常生理情况下，血细胞和血小板有一定的形态结构，并有相对稳定的数量。

红细胞呈双凹圆盘状，中央较薄（1.0μm），周缘较厚（2.0μm），故在血涂片标本中呈中央染色较浅、周缘较深。

在扫描电镜下，可清楚地显示红细胞这种形态特点。

红细胞的这种形态使它具有较大的表面积（约140μm2），从而能最大限度地适应其功能――携O2和CO2。

白细胞为无色有核的球形细胞，体积比红细胞大，能作变形运动，具有防御和免疫功能。

在血涂片中，血小板常呈多角形，聚集成群。

血小板中央部分有着蓝紫色的颗粒，称颗粒区；周边部呈均质浅蓝色，称透明区（hyalomere）。

电镜下，血小板的膜表面有糖衣，细胞内无核，但有小管系、线粒体、微丝和微管等细胞器，以及血小板颗粒和糖原颗粒等。

（2）任意选择你所看到的动物细胞和植物细胞各一个，绘图并进行适当标注，测量其大小，并比较动植物细胞大小的差异。

就植物叶片的栅栏组织细胞和红细胞而言，栅栏细胞为长方体形，体积较大，紧密排列成栅栏状；红细胞圆饼状，体积较小，具体数值如实验数值所示
（3）在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小一致吗？你认为在哪个放大倍数下测定得比较准确？为什么？
测定结果不相同。

由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

但是由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，故当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。

在40倍物镜下看更准确，因为观察的台尺更清晰，可以更精确的读数。

二、PAS反应显示糖原和其他多糖物质
1.实验结果及分析
图2.1.1土豆切片PAS染色（紫红色颗粒）图2.2.1小鼠肝细胞PAS染色（紫色颗粒）
2.思考题
1、为所观察到的土豆切片和鼠肝切片绘图，标注其多糖的位置，并描述这两种细胞的多糖分布特点。

肝脏切片中，多糖位置表示在靠近核的区域，而土豆细胞中多糖在细胞质液泡中。

2、影响PAS反应染色效果的关键步骤是什么？
1.Camey固定液固定；
2.Schiff染色液染色；
3.对分色的控制。

3、如何制作徒手切片？应注意什么才能得到薄而均匀的切片？
需要快速连续地地切下多片薄片，从中选出较好的切片。

三、叶绿体的分离与荧光观察
1.实验结果及分析
图3.1.1叶绿体自发荧光（图中红色小圆点） 图3.1.2叶肉表皮细胞叶绿体自发荧光（图中红色小圆点）
从图中可以看出，叶绿体主要集中于液泡的周围，呈现红色。

2.思考题
（1）描述你所观察到的实验现象，自发荧光和次生荧光的区别？
有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光），如叶绿素的火红色荧光。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。

（2）叶绿体分离的原理是什么？操作过程中应注意什么？
通过研磨植物叶片使细胞破损，叶绿体释放到提取液中，再通过等渗介质中差速离心去除杂志，再次离心分离出叶绿体沉淀；注意在低温下迅速提取，注意等渗液溶度，离心速度和时间的把握，避免叶绿体破裂。

四、吖啶橙染色观察口腔上皮荧光
1.实验结果及分析
从图3.1.1中可以看出，菠菜叶片表皮细胞中的叶绿体数目比较少，而在气孔细胞中的叶绿体数目比较多。

从图3.1.2中可以看到，口腔上皮细胞的细胞质发出红色荧光，而细胞核发出的荧光是绿
图4.1.1菠菜叶片表皮细胞叶绿体吖啶橙染色（图中红色小圆点为叶绿体，亮黄色纺锤体状的为气孔）
图4.1.2口腔上皮细胞荧光染色（绿
色为细胞核）
色的。

五、植物细胞骨架的光学显微镜观察
1.实验结果及分析
图 5.1.1洋葱内表皮细胞骨架考马斯亮蓝
R250染色（蓝色的丝状结构为细胞骨架）
这个标本中的骨架分布得比较全面，几乎充斥着整个细胞内部。

2.思考题
（1）绘出洋葱细胞的骨架网络分布。

（2）根据M-缓冲液的成分，分析其作用。

咪唑：稳定PH值，缓冲作用；KCL：提供离子，对骨架起聚合作用；MgCl2:提供离子，对骨架起聚合作用。

EGTA：螯合Ca离子Ca离子对聚合不利；EDTA：螯合Ca离子Ca离子对聚合不利；巯基乙醇：起还原作用，稳定骨架结构。

（3）通过实验过程，推测你所观察到的细胞骨架属于胞质骨架中的哪种类型，为什么？
推测洋葱的细胞骨架属于中间纤维。

六、PEG法诱导细胞融合
1.实验结果及分析
图6.1.1鸽子血细胞融合 图6.1.2鸽子血细胞融合
从这两幅图中，我们可以看出鸽子血细胞在融合前与融合后的不同，融合后的细胞是好几个聚合在一起的，融合之前是分散开的。

2.思考题
（1）请分析Hanks 溶液的作用是什么（可以从其成分的角度来回答）？
作为平衡盐溶液；终止细胞融合；细胞悬液，使细胞分散 （2）PEG 诱导细胞融合率受哪些因素影响？
PEG 的相对分子质量、PEG 的体积分数、融合时的温度、时间。

七、动物骨髓细胞染色体标本的制备与观察
1.实验结果及分析
图7.1.1小鼠骨髓细胞染色体
从这两幅图中，我们可以看出染色体的形态及分布区域。

2.思考题
在制备小鼠骨髓细胞染色体时为什么要进行预固定？
图7.1.2小鼠骨髓细胞染色体（细胞分裂被阻断在中期，染色体聚集在一起）
因为在之前得到的染色体都处于不同的分裂期，预固定是为了使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期，便于观察。

其实质就是把细胞杀死，使其无法继续进行有丝分裂。

八、酵母活性检测及线粒体原位
1.实验结果及分析 （1）图片
（2）数据
处理方法 活细胞 死细胞 存活率 衰老细胞 0 159 0 静置 18 54 25% 震荡 109
13
89%
TTC
图8.1.1酵母细胞台盼蓝染色（图中蓝色细胞是死亡的细胞）
图8.1.2老化酵母詹纳斯绿染色（图中死细胞为无色，活细胞线粒体呈蓝色）
图8.1.3静置酵母詹纳斯绿染色
图8.1.4震荡酵母詹纳斯绿染色
处理方法活细胞死细胞存活率
衰老细胞 2 71 2.7%
静置48 36 57.1%
震荡172 2 98.8%
美兰
处理方法活细胞死细胞存活率
衰老细胞11 70 13.6%
静置39 21 65%
震荡71 17 80.7%
2.思考题
（1）三种染色方法所得存活率差异原因探讨。

美兰和TTC染色原理都与细胞活性有关，所以染色结果即使活细胞也有染色差异，对观察计数有影响，台盼蓝只是判别细胞存活或是死亡，结果较明显。

（2）绘制光学显微镜下TTC染色的酵母细胞图。

（3）设计实验验证美兰染色及台盼兰染色原理上是否存在差异。

是存在有差异；美兰可以透过活细胞，区别的原理是活细胞体内有美兰的分解酶；而台盼蓝染色中，则是以细胞膜通透性作为区别，活细胞完全隔绝染液进入，死细胞不能，染色剂能进入死细胞中使胞质染色。

（4）比较詹纳斯绿B与TTC染色结果的差异。

詹纳斯绿B染色使线粒体呈现蓝绿色，而胞质显无色；TTC染色使细胞中线粒体呈红色，其他胞质部分呈无色。

九、细胞分裂中期纺锤体和染色体结构荧光观察
1.实验结果及分析
9.1.1Hela细胞传代培养细胞9.1.2分裂中期和后期染色体形态
在本次实验中，虽然细胞传代比较困难，但我们还是比较成功的，虽然在后面我们组的细胞板被打翻了两片，但其余两片的观察结果还不错，得到了几个比较清晰的观察结果，不过以后我们操作就要更加小心了。