《临床生物化学与检验》实验教学大纲(供检验医学专业本科教学使用)蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室制定二OO八年八月蚌埠医学院《临床生物化学与检验》课程实验教学大纲课程编号：课程名称：临床生物化学与检验英文名称：Clinical Biochemistry and Techniques of Biochemistry课程性质：专业主干课程适用专业：医学检验本科考核方式：日常考核、操作考核、提交实验结果。

实验成绩的构成是由实验报告成绩、平时成绩、实验考核成绩三部分组成。

实验总成绩40分，其中实验报告成绩15分、平时成绩10分、实验考核成绩15分。

课程简介：本课程是医学检验专业本科生的必修课程，临床生物化学和生物化学检验是由生物化学、分析化学、临床医学等学科交叉融合而形成边缘学科，是临床医学的不可分割的重要组成部分，是医学检验专业学生的主干课程之一。

临床生物化学和生物化学检验着重阐述了人体疾病发病机制中的生物化学改变，临床生物化学检验方法的原理、方法学评价、检测结果的临床意义和如何按循证医学要求合理选择相关检验指标。

教学大纲要求总学时162学时，其中理论教学68学时、实验教学68学时，实验教学共15实验类别，共计26个实验。

选用教材：钱士匀.主编.临床生物化学与检验实验指导.人民卫生出版社，第三版.2007.实验一生化实验要求、电教一、类别：示教性实验二、实验目的和要求：【掌握】1.正确使用玻璃器材。

包括：⑴认识玻璃器材。

⑵掌握玻璃器材的分类。

⑶掌握玻璃器材的正确使用方法。

⑷掌握玻璃器材的正确清洗方法。

⑸了解玻璃器材的校准方法。

2.正确使用各种加样器。

【熟悉】1.实验室的规则。

2.药品和试剂的分级和使用原则。

【了解】检验科临床生化室的基本操作流程及实验室规则。

三、实验内容：1．介绍实验室的一般规则，包括实验秩序、药品和试剂使用规则。

2．发实验器材。

3．观看电教，熟悉相关器材与仪器的正确使用。

四、学时：4学时五、主要仪器设备：电视机、放像机、可调微量加样器等。

六、实验中注意事项：1．观看电教片时，注意记录电教中的要点。

2．认真观察授课教师的示教内容。

3．遵守课堂纪律，熟悉实验室规则。

2．注意操作时试剂的加入顺序。

实验二血清蛋白质测定一、类别：设计性实验二、实验目的和要求：【掌握】1．双缩脲法测定血清蛋白质含量的原理和方法。

2．溴甲酚绿法测定血清清蛋白的原理和方法。

3．醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理、操作步骤、实验结果的分析及注意事项。

【熟悉】1．双缩脲法测定血清蛋白质含量的注意事项及临床意义。

2．溴甲酚绿法测定血清清蛋白的注意事项及临床意义。

3．琼脂糖凝胶电泳法分离血清蛋白质的原理及操作步骤。

4．血清蛋白电泳的临床意义。

5．蛋白质测定的各种方法的原理及评价。

【了解】1．血清中其它蛋白质的测定原理。

2．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的原理。

三、实验内容：1．介绍双缩脲法测定血清总蛋白质含量的原理、操作方法及注意事项等内容。

2．介绍溴甲酚绿法测定血清清蛋白的原理、操作方法及注意事项等内容。

3．介绍蛋白质测定的各种方法的原理及评价。

4．介绍醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理、操作步骤、实验结果的分析及注意事项。

5．介绍琼脂糖凝胶电泳法分离血清蛋白质的原理及操作步骤。

6．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：8学时五、主要仪器设备：水浴箱、分光光度计、离心机、微量加样器及电泳仪、电泳槽等。

六、实验中注意事项：（一）双缩脲法测定血清总蛋白质试验的注意事项：1．黄疸血清、严重溶血；葡萄糖、酚酞及溴磺酞钠对测定血清总蛋白有明显干扰，需用标本空白管来消除。

2．高脂血症混浊血清会干扰双缩脲法测定血清总蛋白的比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。

向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。

（二）溴甲酚绿法测定血清清蛋白试验的注意事项：1．BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8(显黄色)～5.4(显蓝绿色)，因此控制反应液的pH是溴甲酚绿法测定血清清蛋白的关键。

2．配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。

但以琥珀酸盐缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。

3．当60g/L的白蛋白标准液与BCG结合后，溶液光径1.0ml，在630nm处测定的吸光度应为0.811±0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。

（三）醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质试验的注意事项：1．通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM，以防触电。

2．CAM在电泳前，必须浸泡在巴比妥缓冲液中，使薄膜浸泡透彻。

3．缓冲液液面要保证一定高度，同时电泳槽两侧的液面应保持同一水平，否则通过薄膜时有虹吸现象，会影响蛋白质分子的泳动速度。

4．电泳常见的缓冲液为巴比妥缓冲液，用硼砂，Tris和EDTA组成的缓冲液可以分离出前白蛋白，三种 -球蛋白，三种β-球蛋白和γ-球蛋白。

5．电泳后区带应无拖尾，各区带明显分开，如果电泳图谱分离不清或不整齐，最常见的原因有：①点样过多；②点样不均匀、不整齐，样品触及薄膜边缘；③薄膜过湿，样品扩散；④薄膜未完全浸透或温度过高导致局部干燥或水分蒸发；⑤薄膜与滤纸桥接触不良；⑥薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行；⑦缓冲液变质；⑧样品不新鲜；⑨CAM 质量不高等。

6．染料问题染料的选择应对蛋白质的各组分亲和力相同，吸光度与蛋白质的浓度成正比。

并要求水溶性好、染料稳定、吸光度敏感，形成的染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色。

现在常用丽春红S、氨基黑10B和尼基黑作为染料，其中尼基黑对蛋白质吸光度比氨基黑10B敏感3倍以上。

用光密度计扫描定量一般用丽春红S染色，比色法定量既可用丽春红S也可用氨基黑10B染色。

在血清蛋白正常浓度范围内，丽春红S能与各蛋白质组分成正比例结合而氨基黑10B却对白蛋白染色过深，导致白蛋白结果偏高，球蛋白偏低。

实验三血糖测定、半自动生化分析仪的使用一、类别：验证性实验二、实验目的和要求：【掌握】GOD-POD法测定血糖的原理、方法、操作方法、及注意事项。

【熟悉】1．血糖测定的临床意义。

2．己糖激酶法测定血糖的原理和方法。

3．半自动生化分析仪如何进行血糖浓度的测定。

【了解】邻甲苯胺法测定血糖的原理。

三、实验内容：1．介绍GOD-POD法测定血糖的原理、注意事项及临床意义。

2．介绍己糖激酶法测定血糖的原理和方法。

3．讲授半自动生化分析仪的操作方法及如何进行血糖浓度的测定。

4．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：4学时五、主要仪器设备：水浴箱、分光光度计、离心机、BT-224型半自动生化分析仪等。

六、实验中注意事项：1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。

葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。

国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。

新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。

2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。

因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

取草酸钾6g，氟化钠4g。

加水溶解至100ml。

吸取0.1ml到试管内，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天内不凝固并抑制糖分解。

实验四血清总胆固醇和血清甘油三酯测定一、类别：验证性实验二、实验目的和要求：【掌握】1．磷酸甘油氧化酶法测定甘油三酯的原理。

2．胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。

【熟悉】1．乙酰丙酮显色法测定甘油三酯的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

2．邻苯二甲醛法测定总胆固醇的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

3．测定甘油三酯和总胆固醇的临床意义。

【了解】胆固醇和甘油三酯的测定发展史及方法学进展。

三、实验内容：1．介绍胆固醇和甘油三酯的测定发展史。

2．介绍乙酰丙酮法测定甘油三酯的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

3．介绍磷酸甘油氧化酶法测定甘油三酯的原理。

4．介绍胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。

5．介绍邻苯二甲醛法测定总胆固醇的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

6. 学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：4学时五、主要仪器设备：水浴箱、分光光度计、微量加样器、BT-224型半自动生化分析仪等。

六、实验中注意事项：（一）乙酰丙酮法测定甘油三酯实验的注意事项：1．血清TG易受饮食的影响，在进食脂肪后可以观察到血清中甘油三酯明显上升，2～4h内即可出现血清混浊，8h以后接近空腹水平。

因此，要求空腹12h后再进行采血，并要求72h内不饮酒，否则会使检测结果偏高。

2．显色后吸光度随时间延长会有一定量的增高，故加样后要立即比色，当标本过多时，可置冰箱中逐管进行比色。

3．本方法所用试剂较稳定，室温下可保存半年，分装使用可避免因试剂污染而引起的空白值升高。

4．皂化、氧化及显色的时间和温度对吸光度均会有影响，所以每测定一批都应该同时做标准对照。

5．TG在12.93mmol/L以下时，线性关系良好，当血清明显混浊时，可用生理盐水作倍比稀释后再测。

6．以血浆作标本时，还应注意抗凝剂的影响，通常使用EDTAK2(1 mg/ml)作抗凝剂。

（二）邻苯二甲醛法测定总胆固醇实验的注意事项：1．注意浓硫酸试剂使用的注意事项。

2．注意加入浓硫酸后要在旋涡混匀器上振荡至少1分钟或采取冲洗混匀的方式。

3．显色液稳定时间为半小时。

实验五血清钠、钾、氯的测定一、类别：综合性实验二、实验目的和要求：【掌握】1．离子选择电极法测定血清钠、钾、氯的原理、方法及注意事项。

2．硫氰酸汞比色法测定血清氯的原理、方法及注意事项。

【熟悉】1．火焰光度法测定钠、钾的原理和方法。

2．血清钠、钾、氯测定的临床意义。

3．血气分析仪的使用。

【了解】电解质分析仪的维护与保养。

三、实验内容：1．介绍火焰光度法测定钠、钾的原理、方法及注意事项。

2．介绍离子选择电极法测定血清钠、钾、氯的原理、方法及注意事项。

3．硫氰酸汞比色法测定血清氯的原理、方法及注意事项。

4．观看电教（火焰光度计、离子选择电极及血气分析仪的使用）。

5．进行IMS-972型电解质分析仪使用方法、授课教师示教及学生上机操作练习。

6．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：8学时五、主要仪器设备：水浴箱、分光光度计、离心机、电视机、放像机、IMS-972型电解质分析仪等。