DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力
2.1 待测液的制备
将绿原酸(纯度56%)、维生素C 和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL 的无水乙醇溶液。

2.1.1 绿原酸母液的配制 称取 9.0 mg 绿原酸，定容到50ml ，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL 。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。

2.1.2 Vc 母液的配制 称取 mg VC ，定容到100ml ，即可得到VC 的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。

2.1.3 没食子酸母液的配制 称取 mg 没食子酸，定容到100ml ，即可得到没食子酸的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。

2.1.4 DPPH 母液的配制 称取 mg DPPH ，用无水乙醇定容到100ml ，即可得到DPPH 的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。

C DPPH = mg/ml 。

（建议用0.025mg/mL ）
2.2 DPPH.溶液的可见光谱
以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm 下扫描。

A max = nm
2.3 抗氧化活性测定
DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为 nm 。

当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm 处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。

因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强
[4.5]。

具体实验步骤及方法：
精确吸取的DPPH.溶液2mL 与2ml 无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL 无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A 0)。

A 0=
2.3.1 绿原酸样品溶液的抗氧化能力测定
精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与浓度 mg/ml 的DPPH.溶液2mL 混合，摇匀后放置30min 。

以相对应的溶剂(无水乙醇)为对照调零，用分光光度计分别测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A i )，分别测得A i 值。

A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。

精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与2mL 无水乙醇混合均匀后，以无水乙醇为对照，用分光光度计分别测定各混合液在波长 nm 处的吸光度值(A j )，分别测得A j 值。

A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。

将以上数据代入下列公式计算其清除率。

清除率SR(％)=%100A A A 10j i ⨯⎪⎪⎭
⎫ ⎝⎛
-- 其中，
A i ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸与 2mL 的DPPH.溶液混合后在波长 nm 处的吸光度值； A j ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸分别与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的光值； A 0：2mLDPPH.溶液与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的吸光度值。