A.①②③④ C.①④②③
B.①②④③ D.①④③②
三、基因工程的基本操作步骤
1、获得目的扩增
2、构建重组DNA分子
•工具： 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、质粒
3、将重组DNA分子导入受体细胞
•方法： 植物——农杆菌转化法 动物——显微注射法 细菌——用CaCl2溶液处理
(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用B_c_l_Ⅰ__和__H__i_n_d_Ⅲ__两
种限制性核酸内切酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过 _D_N__A__连__接___酶作用后获得重组质粒。
限制性核酸 内切酶
识别序列及 切割位点
BamHⅠ
G↓GATCC CCTAG↑G
BclⅠ Sau3AⅠ
磷酸二酯键 磷酸二酯键
粘性末端或平末端 重组DNA分子
DNA聚合酶 解旋酶
脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA分子
DNA分子
碱基对中的氢 形成脱氧核苷酸单
键
链
DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 游离的脱氧核苷酸
如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次 表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶 作用的正确顺序是( C )
基因植株的花__色______性状。
一、基因工程
1、核心 构建重组DNA分子 2、原理 基因重组
3、理论基础
•DNA是遗传物质的发现 •DNA双螺旋结构的确立 ——使来自异种生物的DNA拼接
成为可能 •遗传信息传递方式(中心法则)的认定 ——使基因在异种生物
细胞内表达成为可能
4、技术保障 基因工程工具
•注意： •氢键的断裂与形成与限制酶、DNA连接酶无关。
二、基因工程的基本工具
3、基因载体（运载体）
•作用： 作为运载工具，将外源基因送入受体细胞。
•种类： 质粒、噬菌体和某些动植物病毒
质粒
•本质： 小型双链环状DNA分子
•特点： •能自我复制； •常具有抗生素抗性基因 (标记基因)； •其存在对宿主细胞无影响。
(4)若用Sau3AⅠ切割质粒，最多可能获得___7_____种大小不同
的DNA片段。 (5)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复 制所需的原料来自于__受__体__细__胞。
与DNA有关的酶的比较
项目
作用底物 作用部位
形成产物
限制性核酸内 切酶
DNA连接酶
DNA分子 DNA片段
(2)从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA，用 限制__性__核___酸__内__切__酶____分别切割含目的基因的DNA和农杆菌的Ti质
粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA并导入农杆菌。 (3)提取叶片组织的DNA，采用PCR技术_扩__增_____目的基因，鉴
定目的基因是否成功导入。 (4)为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转
•作用特点： 有专一性。即一种限制酶只能识别一种特定核 苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。
•作用结果： 产生黏性未端或平末端
二、基因工程的基本工具
2、DNA连接酶
•连接部位： 两条链的骨架部分，形成磷酸二酯键
GCGAAT T CAA CG CT TAAG T T
•结果： 具有相同黏性末端的两个DNA片段连接起来，形成 重组DNA分子。
• 限制性核酸内切酶 • DNA连接酶 • 基因载体(如质粒)
的发现和应用
二、基因工程的基本工具
1、限制性核酸内切酶（简称限制酶）
•含义： 能够识别和切割DNA分子内一段特定核苷酸序列的 酶。
•来源： 主要从原核生物中分离得到 •种类： 已经发现数千种 •作用部位： 磷酸与脱氧核糖之间的磷酸二酯键
黄金大米，又名"金色大米"，因大米的胚乳细胞能 合成β胡萝卜素而呈现金黄色。
第一章 基因工程
选考查频率
1. 工 具 酶 的 发 现 和 基 因 工
程的诞生
a
基
2015 年 10 月 第 32 题
2.基因工程的原理和技术
b
因
(1)(2)(5)(6)(4分)
3.基因工程的应用
模拟练习
1. (2017·10月新高考联盟 节选)利用现代生物技术，让已知碱 基序列的人胰岛素原基因表达，获得基因产品。请回答： (1)可以用_化__学___合__成__方法获得目的基因(人胰岛素原基因)。 (2)目的基因与质粒在限___制__酶__、__D__N__A__连__接__酶_的作用下，形成重组质 粒。重组质粒是否转移到大肠杆菌宿主细胞中，可用含有四环素 的培养基进行筛选，原因是重组质粒上有_四__环__素___抗__性______基因。 (3)经过培养，目的基因在宿主细胞内大量扩增，并合成人胰岛素 原。若要使目的基因在细胞外大量扩增，可用_P__C_R____技术扩增。 (4)将该目的基因利用___A_____(A.显微注射法 B.农杆菌转化法 C.细胞融合法 D.氯化钙诱导法)导入牛受精卵，经胚胎体外培养 获得早期胚胎，经_胚__胎__移___植__转移到受体的输卵管或子宫角，可获 得转基因牛。
T↓GATCA ↓GATC ACTAG↑T CTAG↑
HindⅢ
A↓AGCTT TTCGA↑A
TGATCC(GGATCA) ACTAGG(CCTAGT)
(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，
连接部位的6个碱基对序列为__________，对于该部位，这两种 酶_都__不__能___(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。
模拟练习
下表中列出了几种限制性核酸内切酶识别序列及其切割位点， 图1、图2中箭头表示相关限制性核酸内切酶的酶切位点。请回答
限制性核酸 内切酶
识别序列及 切割位点
BamHⅠ
G↓GATCC CCTAG↑G
BclⅠ Sau3AⅠ
T↓GATCA ↓GATC ACTAG↑T CTAG↑
HindⅢ
A↓AGCTT TTCGA↑A
a
工
2016 年 4 月 第 32 题
4.活动：提出生活中的疑 c
程
(二)(1)(3分)
难问题，设计用基因工程
技术解决的方案
选考真题
1.(2015·10月浙江选考 节选)科研人员拟将已知的花色基因 (目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。 请回答：
(1)为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质 粒DNA形成重组DNA，再与经__A______(A.氯化钙 B.氯化钠 C.蔗糖 D.葡萄糖)处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进入 大肠杆菌。
三、基因工程的基本操作步骤
4、筛选含有目的基因的受体细胞
•筛选对象： 有无目的基因 •筛选方法： 检测是否导入重组质粒—— 含抗生素的培养基
检测是否导入目的基因—— DNA分子杂交技术
5、目的基因的表达
•方法： 检测目的基因是否转录—— 核酸分子杂交技术 检测目的基因是否翻译—— 抗原--抗体杂交技术 从生物个体水平检测—— 是否具备相应的性状