3）捕集 回试位流剂、提及紫取固外荧定扫光相描板最应好洗不脱显后色再比色
4）洗脱
5）显色及比色
薄层色谱扫描法（Thin Layer Chromatography Scan TLCS）
定义 指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层
色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产
生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分
c)操作步骤
（1）对照品溶液的制备 （2）供试品溶液的制备 （3）点样 一般要求使用市售薄层板。
①外标一点法：至少6个原点 对照品（R）2个（同一质量）：2R 供试品（S）4个（同一质量）分2组： 2S1 2S2
②外标两点法：至少8个原点
对照品（R）4个 分2组 大质量的2个：2R1 小质量的2个：2R2
主要化学成分:皂苷类（甘草酸）、黄酮类 （甘草苷）、香豆素类、氨基酸和多糖类 化合物。
14批甘草TLCS-3D-FP
聚酰胺薄层指纹图谱（PA-TLCSFP)
甘草聚酰胺薄层扫描图谱
1、薄层色谱法定量的特点
设备简单，操作方便。 可以采用多种展开方式：如，双向展开，多
次展开，分步展开，连续展开。
若标准曲线通过原点，采用外标一点法。 若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。
、
外标一点法的直线方程： C = F A F 为斜率
外标两点法的直线方程： C F1 A F2
F1为斜率
F1
C2 A2
C1 A1
F2为截距
F2
A2C1 A2
A1C2 A1
【说明】在根据药品标准测定样品时，并不需要做标准 曲线，按照药品标准规定执行即可。当然，测试者应能 从中明确该测定是外标一点法还是外标两点法。
外对光玻（板激和发斑光点）的进质行量扫要描求。不高。 测定时，样品波长（λs）和参比波长（λR）依次扫
（2描）斑双点，波所长测吸收度为ΔA=Aλs －AλR。
样品波长（λs）：即被测成分的λmax 参比波长（λR）：即被测成分的λmin或此波长 处无吸收。
光束扫描方式
（1）直线扫描 适用于规则的斑点，仅用于 荧光测定法。
含量测定方法（外标法）
TLCS含量测定采用外标法。 a)原理 将供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上， 展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸 收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。 b)类型 根据对照品标准曲线性质的不同，分为外标一点法和外 标两点法。
含量测定方法概况
仪器 分析法
化学 分析法
总计
方法 HPLC TLCS
GC 分光光度法
滴定法 重量法 氮测定法 挥发油测定法 浸出物测定法
应用品种数 339 32 23 18
13 5 5 3 13 456
新增 282 12 19 3
3 1 1 0 2 327
一、薄层色谱法
甘草的硅胶薄层扫描指纹图谱 (SG-TLCS-FP), fingerprint
（2）锯齿扫描 适用于不规则的斑点，测量 误差小，被测成分积分值重现性好，故吸收
测定法常用此扫描方式。
光源
（1）钨灯（W）：供可见光（350～800nm） 测定，扫描有色成分的斑点。 （2）氘灯（D2）：供紫外光（200～400nm） 测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。 （3）氙灯（Xe）：供荧光测定，发射不连续光 谱，常用波长为365nm。
值用于药品定性定量分析的方法。
特点 具有分离分析双重功能。
Off-line
实验仪器
CAMAG LiBiblioteka omat 5 半自动点样仪 CAMAG 数码摄像系统
CAMAG Scanner3 薄层色谱扫描仪
仪器及其工作原理
工薄作层原扫理描仪 中国药典采用双波长薄层扫 描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAGⅡ型等。
供试品（S）4个（同一质量）分2组： 2S1 2S2 对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种 误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整 供试品溶液的点样量。
外标一点法
外标两点法
（4）展开 （5）显色定位 供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫 描得 到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的 准确性。 （6）扫描 应沿展开方向扫描，不得横向扫描。 （7）含量计算 ①外标一点法 ▲求出供试品被测成分（斑点）的质量
适于分析热不稳定，难挥发的样品。
如何进行薄层色谱法定量
2、固定相种类
硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物
质分离（可以制备成酸度不同或碱性硅胶扩大使
用范围）
氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性
物质分离（可以制备成中性或酸性氧化铝扩大使
用范围）
聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、
醇类化合物的分离
纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离
亲水性物质
常见薄层色谱定量方法
薄层色谱-紫外分光光度法 Off-line
薄层色谱-可见光分光光度法
1）点样 2）定位
洗 渗显时定紫脱 漉点色 间位 外： 、样及 、： 、类多：比 反对 荧似次条色 应照 光浸状： 温的 、柱出，显 度位 碘色、5色 显置 蒸谱0加剂 色－，气热用稳3区、0温量定带对0浸、性u的照l、反空范品索应白围定氏
测定方式
（1）吸收法 适用于有紫外（可见）吸收的成分。
该法又分为反射法或透射法测定。实际工作中常用 反射法。
（2）荧光法 适用于有荧光性质的成分，例如小檗
碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法 高。
测定波长
（（（112）））单双单波波波长长长用主于要荧用光于测吸定收法测，定即法用。某可一消波除长背的景紫干扰，
★意义：是否符合药品标准的规定来判断药 品的优劣，是控制和评价药品质量的重要 方法。
常见分析方法
化学分析法：容量分析、重量分析 还包括挥发油含量测定和浸出物的测定。 仪器分析法：TLC、 HPLC 、GC、HPCE、
分光光度法等。
注：由于中药制剂组成复杂，更为常用。
2005年版《中国药典》中成药
China Pharmaceutical University
中
国
药
科
大
学
中药分析
药物分析教研室
第五讲 中药含量测定与
方法学验证
1 含量测定的定义和意义 2 含量测定常用分析方法 3 分析方法验证
含量测定定义和意义
★定义：指用适当的化学方法或仪器分析方 法对制剂中某种（些）有效成分或有效部 位进行的定量分析。