四、动物实验及设施设备操作规程1、屏障设施使用操作规程（1）人员进出进入一更前将头发盘起，在更衣室外消毒槽站立片刻换拖鞋进入一更，关闭一更门，将门反锁。

脱下外衣放入更衣柜，更换为灭菌后内衣，将一更门解锁。

打开二更门，更换二更拖鞋，进入二更，以感应式消毒器对手消毒，戴口罩、帽子，头发应全部塞入帽子里，消毒液洗手，戴无菌手套，然后穿隔离衣。

以手套将隔离衣袖口封紧。

在消毒液内擦洗手套，要将手套表面指缝、腕部仔细擦洗。

实验人员进入动物实验室，更换各自实验室的拖鞋。

每天操作完毕，各实验室拖鞋于消毒液中洗净取出于本室晾干。

摘去手套，将手套整体泡入另一消毒盒内，关闭二更内侧门，换拖鞋。

将二更外侧门边放置的拖鞋拿到内侧门边摆放整齐，人员即可离开，离开前将拖鞋在消毒液中浸泡5分钟。

进入一更，脱去无菌内、外衣，更换自己衣服，出一更，将无菌衣拿出。

开一更、二更紫外灯消毒。

每次进出动物实验室须填写记录表。

（2）物品进出外购的饲料经紫外灯照射20—30分钟后传入内储存室。

饲料在实验区内存放，不能超过两周。

夏季注意防霉防潮。

垫料经双扉高压蒸汽灭菌柜灭菌后传入内储存室。

小件笼具等经双扉高压蒸汽灭菌柜灭菌后传入内储存室。

大件笼具经消毒浸泡后，再喷雾消毒三遍方可进入。

不能耐高温物品如消毒液瓶等，将外表擦拭干净后，用消毒液浸泡消毒，由传递窗进入饲养室准备间。

所有实验用品先用消毒剂进行表面灭菌或喷雾灭菌后再放入传递窗中经紫外灯照射20—30分钟后从内储存室侧取出。

待洗刷物品经内储存室传入消毒室。

废弃物、动物排泄物装入塑料袋，密封后经污物传递窗传出。

实验结束后，实验用品通过内储存室传递窗传出。

（3）动物管理动物进入：动物引进应先放入隔离检疫室，待隔离检疫合格后移入饲养室。

动物进入洁净区前，首先按照动物运输箱上的标签，核对动物的出生日期、品系名称、性别、数量、供应单位名称、动物的微生物控制等级等是否与计划相符。

用消毒液如5％百毒杀、0.5％～1％过氧乙酸等喷雾消毒运输箱的表面。

将运输箱置于检疫室的传递窗内，再用消毒液喷雾，关上传递窗外门后，打开紫外灯照射10min。

打开运输箱，取出动物置于隔离检疫室饲养盒内。

检疫合格后进入实验区。

饮水：每天供给灭菌水。

注意检查瓶塞是否漏水或堵塞。

饲喂：饲料自由采食，充足供给，及时添加。

掉到地上的料块、发霉的及高压过度的饲料，及时移出，不再用于饲喂。

更换垫料：每周一、四，更换垫料。

周一用消毒液清洗饲养盒、盖。

将饲养盒内的垫料清扫干净，消毒夜清洗后，放入新垫料，把动物轻轻移回。

换下的垫料装袋及时移出。

操作时随车设一消毒盒，每隔1 0分钟洗手消毒一次。

淘汰处理：死亡动物装入塑料袋，密封后经污物走廊传出，放冷冻箱内暂存，集中送相关单位做无害化处理。

每次实验完毕后，动物尸体及实验废弃物处理时须填写记录。

（4）物品消毒原则：凡耐高压物品，均采用高压消毒的方法。

包括饲料、垫料、笼具、水、水瓶、隔离衣等。

不能高压物品，擦拭干净，用消毒夜浸泡后，再由传递窗进入饲养室准备间。

方法：将分装好的饲料、垫料、水等物品，由外门放入真空灭菌器内，关好门，设定好程序，检查无误后，启动灭菌器，待程序结束后，由内门将消毒物品直接移入饲养室，关好内门。

①笼具架a.先将笼具架用中性洗洁液擦拭，擦净污渍，再用清水冲净，最后抹布擦干。

可以高压蒸汽灭菌的笼具架用高压蒸汽灭菌。

预真空高压蒸汽灭菌器参数为脉动3次、132℃灭菌4分钟，干燥2分钟。

b.不能高压蒸汽灭菌的笼具架擦拭干净、消毒液表面消毒三遍后进入。

②饲养盒和垫料a.先清除盒内的污物，用水将盒的内外壁冲洗干净，晾干。

b.在适当位置放指示卡，注意饲养盒之间应留有缝隙，然后进行高压灭菌。

灭菌参数为脉动3次，132℃4min，干燥2min。

c.灭菌完毕后，应确认灭菌效果达到要求，再将饲养盒放到消毒后室，贴上标签，标明消毒日期。

存放时间不超过7d。

③垫料a.垫料应选择无毒性、无异味、无油脂、吸湿性好、粉尘少的材料。

b.垫料过筛后分装入鼠盒中,每盒2-3cm厚。

6个盒子一摞，每摞最上层盒子不装垫料。

置于高压蒸汽灭菌器灭菌室中。

关闭高压锅门，灭菌参数为脉动3次、132℃灭菌5min、干燥3min。

灭菌后的垫料贴上标签，标明灭菌日期。

存放于消毒后室。

存放时间不超过7d。

④饮水瓶a.清除饮水瓶里的剩水，清水冲净。

将其置于容器中，放入指示卡。

b.灭菌参数为脉动3次、132℃3min、干燥2min。

c.检查指示卡的颜色，确认灭菌效果达到要求，贴上标签，标明灭菌日期，放在消毒后室。

存放时间不超过7d。

⑤饮水a.将水瓶充分洗净后，摆放入盒，然后瓶中装入无菌水，将瓶塞歪放在瓶口上，不要盖紧。

在水瓶的适当部位贴上指示卡。

然后放入高压蒸汽灭菌器进行灭菌。

灭菌参数为置换20min、125℃30min。

b.灭菌后，查看指示卡的颜色，确认灭菌效果达到要求，将饮水瓶盖子盖紧，直接放入饲养室。

存放时间不超过7d。

⑥饲料首先检查饲料是否腐败、变质，确认质量合格后，将饲料分装成小袋，随机在两袋中放置指示卡，扎好袋口，高压蒸汽灭菌器灭菌室内上下层各放置一袋，袋与袋之间要有充分的空隙。

关闭灭菌器门，灭菌参数为脉动3次、132℃灭菌4min、干燥5min。

标明灭菌日期。

存放时间不超过7d。

⑦无菌水的使用仅限于饲养室的消毒用水。

⑧衣服、毛巾a.用中性洗涤剂洗净衣服、毛巾，清水冲洗干净，晾干，叠整齐。

b.将指示卡放在衣服、毛巾中间，内衣和猴服分开并标记清楚，然后用双层布袋包裹严密，置于容器中。

灭菌参数为脉动3次，132℃4min，干燥4min。

c.检查指示卡颜色，确认灭菌效果达到要求，置于第二更衣室衣柜中。

⑨新购置的物品a. IVC、笼具架等大型物品在一楼拆去包装，检查有无昆虫，然后搬至专用区域，进行安装、消毒。

b.消毒时，将笼具架的轱辘泡在消毒液中，笼具架表面用消毒液擦拭。

一般可用季铵盐类消毒液如新洁尔灭，也可以用百毒杀等。

擦拭完毕喷雾消毒。

再次检查其表面是否还有污物、昆虫等，然后进行第二次喷雾消毒。

搬至洁净区入口处进行第三次喷雾消毒。

c.其它物品进入均按相应操作规程。

⑩物品的定期消毒a.笼具架在每次更换垫料时用2～3％新洁尔灭或0.5%百毒杀消毒液擦拭。

b.手消毒液定期更换。

c.室内排气口的初效过滤器每周清洗一次，然后用上述消毒液浸泡，沥干水分后重新装上。

IVC的初效过滤介质每周清洗消毒一次。

d.传递窗每次使用后用消毒液擦拭，紫外灯照射15min。

e.饮水瓶、饲养盒每周高压灭菌1次，饲养盒盖每月高压灭菌一次。

（5）清洁卫生①环境清洁消毒动物实验室台面、地面及走廊每日工作后用抹布和墩布擦拭一次，每周一和周四用1％甲酚皂消毒液或0.1％新洁尔灭溶液擦拭或0.5％过氧乙酸喷雾消毒一次；三种消毒每三周更换一次，交替使用。

周边环境卫生区每天打扫，拖地，每周至少消毒两次。

紫外灯每天早晚开启两次，每次15分，不能与日光灯同时开启。

②实验用仪器设备的清洗消毒a.实验用的分析仪器和设备使用完毕后，用绸布擦拭后再用棉球蘸取75％b.实验中所用的器皿应洁净，其内壁应能被水均匀的润湿而无水的条纹且不挂水珠。

c.实验中的烧杯、锥形瓶、量杯等一般的玻璃器皿在实验完毕后，用2％洗涤灵或1％洗衣粉刷洗，再用水冲洗干净，然后用水洗2～3次。

d.滴定管、吸管、容量瓶等器皿使用后用洗液浸泡4小时，取出后用水冲洗干净，然后用纯化水润洗2～3次备用。

③清洁液的配制a. (2％)洗涤灵液的配制：取洗涤灵20ml，加水至1000时，做为清洗用。

b. (1％)洗衣粉的配制：取洗衣粉30克，加水至3000ml，做为洗涤用。

c. 洗液的配制：称取重铬酸钾80克，加少量蒸馏水加热，使其溶解，待半冷后，缓慢加入浓硫酸液100时，然后加蒸馆水至1000ml即成。

采取此方法制备时一定要注意安全，切不可把重铬酸钾的水溶液加入浓硫酸中，以免引起发热导致爆炸事故。

④消毒液的配制a. 1％甲酚皂溶液：取50％甲酚皂溶液20ml加水至1000时，即为1％的溶液，作为室内喷雾消毒用。

b. 0.1％新沽尔灭溶液的配制：取5％新洁尔灭40m1加灭菌水至2000m1，使之成为0.1％的溶液，作为器械等浸泡消毒用。

c. 0.2％过氧乙酸液的制备：将过氧乙酸1#和2#按体积1：1均匀混合，在室温条件下放置24小时，将混合后的过氧乙酸原液一份加入89份无菌水，即配制成0.2%的消毒液。

d. 75％酒精的配制：取95％酒精78.95m1加灭菌水21.05m1至100ml备用。

⑤每次洗刷消毒须填写记录表。

⑥环境控制实验期间每天记录环境温湿度情况。

屏障环境要求：温度20℃～26℃范围；相对湿度40％～70％。

通风换气：合理安排笼架位置，保持室内空气新鲜。

氨浓度应小于14ppm，硫化氢含量应低于0.0001％。

及时更换过滤介质，初效每周更换二次，中效每⑦设备管理空调开启时，每周将空调滤尘网冲洗一次，晾干后再用。

禁止空调超负荷运转。

水管、暖气管道应每周检查一次，发现问题及时解决。

⑧操作失误及补救措施人员进入时，忘记换拖鞋，把拖鞋重新消毒，受累区域重新消毒。

饲料高压过度，发黑炭化，或有发霉时，应废弃不用。

⑨工作日程安排2、屏障设施日常维护规程（1）过滤层清洗要求①初效箱内初效滤层清洗要求：必须在系统待机状态时更换初效无纺布，主要是根据系统使用状况及季节气候变化情况，一般清洗更换期3天一次，同时清理箱内尘土。

②动物实验室内各个回风窗内过滤网清洗要求：必须在系统待机状态时更换，主要是根据实际情况，见脏时及时取下冲洗干净后即可装上。

（2）中效过滤袋更换要求必须在系统待机状态时更换中效过滤袋。

主要是根据系统实际使用状况，一般更换期为1个月一次，同时清理箱内尘土。

（3）动物实验室内各高效过滤器更换要求在初、中效过滤层确保良好的保护状态下，一般使用周期为3年更换一次。

（4）每次更换过滤器须填写记录表。

3、屏障设施开、关操作程序（1）系统开启操作步骤：冬天：依次开启总电源、开水泵、开启风机、开启电加湿。

夏天：依次开启总电源、开水泵、开启风机、开启风机压缩机、开启制冷压缩机。

（2）系统关闭操作步骤：依次关闭：关闭空调机组、关水泵、分离总电源。

4、普通设施日常维护规程（1）环境指标的控制与监测。

（2）兔饲养室、兔实验室为开放式，定期消毒。

（3）空调系统设有温、湿度自控装置，实验室配有温、湿度表，供随时检测记录。

（4）各房间均安装有紫外灯，用于环境消毒。

（5）动物尸体装袋放专用冰柜，由石家庄市医疗废弃物处置中心负责焚烧。

5、高压蒸汽灭菌器操作规程操作程序（1）灭菌前准备：①先打开总电源开关，然后打开蒸汽锅和灭菌器进水开关，检查水源压力是否达到0.15～0.30 MPa规定压力值；②检查蒸汽锅的水表位，是否在1/3～2/3规定水位处；③打开蒸汽锅电源进行预热；④准备整理待消毒的物品，放入灭菌室内，物品之间要有空隙，四周不要贴于器壁和门板，并放入化学指示卡，填写脉动真空灭菌器使用登记表；⑤检查密封圈、前封板和门板有无杂质和损坏，用干净的棉布进行搽洗；（2）灭菌操作：①关闭封闭门，当蒸汽锅炉压力达到0.4MPa规定压力值和灭菌器夹层压力达到0.2MPa规定压力值时，根据被灭菌物品选择灭菌程序，检查灭菌参数是否正确，启动运行程序；②灭菌过程中，操作人员不得远离设备，应密切观察设备的运行状况，如有异常，及时处理，防止意外事故发生；③做好灭菌效果的监测，记录存档，便于追踪调查；④灭菌结束后，关闭蒸汽锅炉电源，待室内压力回零后，方可打开后门取出物品；⑤灭菌物品从灭菌器中取出后，存放在指定位置，防止二次污染；（3）灭菌后工作：①打开前门，关闭总电源，切断设备控制电源和空气压缩机电源；②关闭供水阀门和冷却水阀门；③工作结束后对灭菌器进行清理，应保持灭菌器清洁干净，以防杂质堵塞；（4）维护与管理①脉动真空灭菌器由动物室专人负责管理；②蒸汽锅进水压力，水位必须达到规定值时才能打开蒸汽锅炉电源；③蒸汽锅炉压力必须达到规定值时才能启动灭菌程序，否则影响灭菌效果；④注意人身安全，在灭菌时远离排汽口，灭菌结束开启后门时要戴好防护用具，以免烫伤；⑤当化学指示卡指示灭菌不合格时，应从新灭菌处理；⑥非经培训过的工作人员，其他人不得乱碰和操作灭菌设备；⑦设备出现故障时，如工作人员不能解决的，及时关闭电源，与厂家维护人员联系进行维修，不得擅自拆卸进行维修，并做好相应记录。