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酚氯仿抽提

酚氯仿抽提
一、DNA抽提
试剂:
1.酚/氯仿/异戊醇(25:24:1);
2.3M NaAc(pH 5.2);
3.80%乙醇。

步骤:
1. 样品加去离子水至总体积100 μL;
2.加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇(25/24/1),充分震荡后,10,000 rpm离心10 min;
3. 转移上清于新的离心管中,按体积的1/10加入3M NaAc(pH5.2),按体积的2倍加入100%乙醇,轻轻混匀后,-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA;
4. 4 ˚C,12,000 rpm离心10 min,弃去上清;
5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀,10,000 rpm离心2 min;
6. 弃去乙醇,风干后,加入适量去离子水或TE溶解质粒。

二、RNA抽提
试剂:
1.水饱和酚;
2.氯仿;
3.3M NaAc(pH 5.2,DEPC水配制);
4.75%乙醇(DEPC水配制)。

步骤:
1. 加入DEPC水至总体积为100 μL;
2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1),室温混匀;
3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min;转移上清至新的离心管中;
4. 加入等体积的氯仿,4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清;
5. 加入上清体积1/10的3M NaAc(pH5.2, DEPC水配制)和2.5倍体积的100%
的乙醇,-80 ︒C沉淀过夜;
6. 4 ︒C离心,12, 000 rpm, 30 min;
7. 去上清,加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制),洗涤沉淀;
8. 12, 000 rpm 离心5 min,去乙醇;风干,溶于适量DEPC水中,-20 ︒C保存。

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