二、土壤微生物量碳、氮的测定方法—熏蒸提取法
1．主题内容与适用范围
本方法采用氯仿熏蒸—提取测定土壤微生物量碳、氮，适用范围广，既适用于中性和微碱性土壤，也适用于强酸性土壤，并且适用于滞水土壤（如水稻土）和新施有机肥土壤。

2．方法提要
土样经氯仿熏蒸和未熏蒸两种不同处理后，用K2SO4溶液浸提，提取液一部分用K2CrO7（重络酸钾）氧化法测定微生物量碳，另一部分用浓H2SO4消煮、碱化蒸馏法测定微生物量氮。

3．提取液的制备
3.1仪器、设备：抽气皿（真空干燥器）、无醇氯仿、抽气机、大铝盒、分析天平（感量：
0.01g）、小烧杯（50ml）、大塑料瓶（250ml）、大三角瓶（150ml）、40C
的冰箱、定量滤纸（15cm）、漏斗、保鲜膜
3.2试剂的制备：0.5 M K2SO4溶液（化学纯）、
无醇氯仿（提纯方法：用1N H2SO4溶液与氯仿(CHCl3三氯甲烷)按体积
比2:1于分液漏斗中振荡混匀，净置分离，共做3次；再用水代替硫酸与
氯仿2:1混匀，振荡分离，共5次，将提纯的氯仿放入到棕色试剂瓶中，
加一勺无水硫酸钠，保存）
3.3分析步骤：
3.3.1 称取12.50g鲜土(取土要准确、均匀，不要夹入有机残体)于大铝盒中。

在抽气皿中放入盛有25ml无醇氯仿的小烧杯，小烧杯中放几张小纸片以便于观察沸腾。

放入装土的
大铝盒，连上抽气机，抽真空使氯仿沸腾5分钟，关紧活塞，关闭抽气机。

包上黑布，置于阴暗处（250C）熏蒸24小时。

到时间后，取出小烧杯后反复抽真空2~3次（每次5分钟），排除氯仿。

另称取一批同等重量的土放入大塑料瓶中，不做熏蒸处理，同样包上黑布，置于阴暗处24小时。

3.3.2 将步骤(3.1.1)中的两批土样转移到离心管中（红壤适宜离心管）。

用注射器注入每瓶50ml 0.5M K2SO4溶液，盖紧瓶塞，振荡30分钟，离心5分钟后取出，用15ml定量滤纸过滤到150ml大三角瓶中，应立即测定。

如不立即测定，用保鲜膜封口（防止污染和挥发），保存在40C的冰箱中。

4．生物量碳的测定—K2CrO7氧化法
4.1仪器、设备：DOC测定仪(冷凝装置4套、配套沸瓶装16个)、玻璃沸珠、1500W电
炉两个、变压器两个、滴定管（25ml）
4.2试剂的制备：蒸馏水、混合酸(浓硫酸:浓磷酸=2:1,分析纯) 、0.1000N K2CrO7标准溶
液
邻菲罗啉指示剂、66.7mM（0.4 N）K2CrO7溶液（19.6125g/L，分析纯）
0.02M (NH4)2Fe(SO4)2溶液：取15.69g/L溶于蒸馏水，用20ml浓硫
酸（98%，分析纯）酸化，而后定容至1L、
4.3分析步骤：
4.3.1吸取2ml 0.4 N K2CrO7溶液放入沸瓶，再吸15ml 混酸放入沸瓶，混合，加入等量的玻璃球（约一小药匙，10个）。

吸取步骤（3.2.2）中的过滤液8~10ml（根据含碳量多。