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实验九碘淀粉比色法测定血清淀粉酶课件
计算
1、单位定义: 100ml血清(浆)中的 AMS,在37℃与底物作用15分钟,水解 5mg淀粉为1个单位。
2、公式:
样本最佳取样浓度摸索
根据不同动物血清及组织之间的差异,最好 是在批量实验之前做个预试以确定最佳取样 浓度。 例1:取大鼠血清用生64倍、 128倍、256倍),取样0.1ml进行检测
试剂 操作步骤 计算 参考值
试剂
1、0.4mg/ml底物缓冲液:4℃冰箱保存6 个月。
2、0.1mol/L碘贮备液:4℃避光保存6个 月。
0.01mol/L碘应用液的配制: 将碘贮备液: 蒸馏水=1︰9稀释,现用现配4℃避光保存。
操作步骤
混匀,660nm波长,1cm光径,蒸馏水调零,测各管吸光度。 *注:不同样本批量测试前需要做预实验,确定最佳取样浓度, 将 (空白OD-测定OD)控制在0.05~0.150之间
实验九碘淀粉比色法测 定血清淀粉酶副本
原理
血清(或血浆)中α-淀粉酶催化淀粉分子 中α-1,4糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽 糖及含有α-1,6糖苷键支链的糊精。在底 物过量的条件下,反应后加入碘液与未被 水解的淀粉结合成蓝色复合物,其蓝色的 深浅与未经酶促反应的空白管比较,从而 推算出淀粉酶的活力单位。
异,一般空白吸光度应在0.40以上。
注意事项
缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物,表示 缓冲淀粉溶液受污染或变质,不能再用, 应重新配制。
本法适用于其他体液淀粉酶的测定。尿液 先作20倍稀释后测定。
注意事项
酶活性在400U以下时,与底物的水解量成 线性。如测定管吸光度小于空白管吸光度 一半时,应加大血清稀释倍数或减少稀释 血清加入量,测定结果再乘以稀释倍数。
草 AM酸Y盐活、性拘有橼抑酸制盐作、用E,D肝TA素-N无a抑2及制氟作化用钠。对 唾液含高浓度淀粉酶应防止带入。 淀粉产品不同,其空白吸光度可有明显差
临床意义
淀粉酶可通过肾小球滤过。流行性胰腺炎, 特别是急性胰腺炎时,血和尿中的AMY显 著增高。急性胰腺炎发病后8~12h血清 AMY开始升高,12~24h达高峰,2~5d下 降至正常。如超过500U有意义,达350U 时应怀疑有此病。
尿中AMY约于发病后12~24小时开始升高, 下降也比血清AMY慢,因此在急性胰腺炎 后期测定尿AMY更有价值。