察氏培养基(CA)、孟加拉红培养基、豆汁培养基、其他；
孟蛋白加P察胨拉D氏5A红g培培、培养养葡养基基萄基成糖成成1分分0分g：：、：磷酸二氢钾1g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)
0霉上.5述素g马 自 硝 氯 水、各0.铃然酸化11琼成0g薯P钠钾0脂分0H230m约加20g.50l0、6g入gg.、、磷0、蒸硫1酸馏葡/3酸氢水0萄亚0二中糖0铁钾孟溶2001加解.gg0拉、、1后g红琼硫，、溶脂酸再蔗液镁加1糖51(孟3-M0200加g0gmgS、拉、lO、琼红4自·蒸7脂溶来H馏2液2水0O水g。)1、100另00.蒸500用g0m馏m、少l、l、量乙氯 醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min
温度 37℃ 28℃ 28℃
培养时间 1-2d 5-7d
14d
注：根据不同培养基性质等因素，培养条件有所差异，需视情况而定。
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四、复筛
将获得的单菌落接种于复筛培养基，给予一定条件进 行培养，对产物产率、性能等相关标准进行评价，即可挑 出所需要的菌株；
根据目标菌的性质进行设计：
霉菌的分离、纯化与鉴定
怎样鉴定微生物呢？
微生物鉴定主要是要回答两个问题：
一、它是不是某一种菌？
——针对性； ——规范的检测鉴定方法； ——如：致病菌检测；
二、它到底是什么菌？
——常规鉴定； ——大致的工作步骤； ——如：筛菌，潜在用途；
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分离资源微生物的基本原则
一、微生物可谓无处不在，获得什么样的微生物， 取决于分离的目的：
4. 稀释摇管法
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⑵用液体培养基获得纯培养 稀释法：
方法：接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀 释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物； 特点：工作量大，是否获得纯培养依靠统计学的推测； 应用：用于不能或不易在固体上生长的菌落；
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3、培养条件
类型
项目
细菌
放线菌
霉菌和酵母菌
——为了分离铁硫杆菌，可将样品加硫磺后培养； ——为了分离分解纤维素或角蛋白等的酶产生菌，可以将样品与
高浓度的纤维素或角蛋白（适当加入其他成分）在适当温度 下保湿培养一段时间，再进行分离；
2、减少非目的菌
——若目的菌耐干燥，则可通过干燥减少非目的菌； ——若要分离高温菌，可在特定高温下震荡培养若干时间，以减
缺 严 注缺 察特 认点格 ：和点和点：厌 取挑：再：操氧 样取由次简作菌 液困于分单相生 约难菌离，对长1；落m；多麻受l形；用烦限成于，；在对热琼已敏脂有感住纯菌中培易间养被，的烫观确死，
3. 平板划线法
应缺用点：：在无缺法乏分专离业得的到厌不氧可设培备养的的情内况生下细 对菌严；格此厌法氧最菌简进便行，分但离可和能观遗察落；部分菌株；
每年春季或旱雨季之交，一般在3-5月为佳；通常采集1040cm深处的土样；若要分离放线菌和真菌，土样应放到无菌牛皮纸袋 中，一般不放在瓶子或塑料袋中；如果要分离细菌，最好要保湿；
海洋环境及湿地：
0.5μm的滤膜过滤水样，以增加出菌率；Ekmann型采泥器或 重锤式取样器采集；样品装入无菌瓶内，不能密封，在3h内用于实验；
⑴具体如下：
开发意图贯穿分离过程，使培养基“只”满足目的菌的要求，
而非目的菌不长；eg.寻找低温碱性脂肪酶产生菌
大剂量加入同类化合物；eg.酒精酵母
特殊成分；eg.维真生菌素抑、制氨剂基：酸放、线无菌机酮盐、等制霉菌素等；
抑制剂：
细菌抑制剂：青霉素、链霉素； 萘啶酸可抑制革兰氏阴性细菌；
放线菌分离中，选用重铬酸钾做抑制剂能很好的抑 制细菌和真菌，几乎不影响放线菌的生长；
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⑵常用培养基
◆细菌——牛肉膏蛋白胨培养基（肉汤培养基）pH7.2-7.4；
注意事项：
◆放线菌——高氏一号培养基；
①在加入凝固剂之前调 pH值；②加酸碱要缓慢，
多搅拌；③加热杀菌后
◆霉菌——马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、查pH氏值酵下母降0膏.3琼-0脂.4培。养基(CYA)、
麦芽汁琼脂培养基(MEA)、甘油硝酸盐琼脂培养基(G25N)、
特定类群微生物的分离（定向分离）； 获取新资源（分离未知菌）； 分离“混合菌”（完成某种功能的一组菌）；
二、分离的基本原则是：
获得目的菌； 排除非目的菌；
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总思路流程
1、目的菌的富集培养；
采样
1、微生物资源的分布； 2、样品的采集：2h、4℃；
2、减少非目的菌；
预处理
3、目的菌的充分释放；
极端环境：
尽量存放在与采样环境相当的条件下至菌种分离；
植物和动物：
确保样品的完整性，迅速对植物切口进行消毒，并用石蜡封 住以防外来菌种入侵，用无菌装置带回；如动物粪便的采集应在动物 排便后马上收集其中间部分，避免外源污染，置于无菌袋内；
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二、样品的预处理
1、目的菌的富集培养
根据目的菌的生理特性，加入其所需要的营养物质及微量成分进 行诱导增殖，增菌；设计特定的有利于待分离菌株生长的环境。
1、培养基设计原则；
初筛 2、分离方法介绍；
1、获得纯培养； 2、选择目的菌株；
复筛
3、培养条件； 1、霉菌简介；
形态学观察 2、菌落形态；
1、真菌的系统发育谱；
2、微生物快速鉴定技术； 生理生化实验
3、霉菌制片观察；
18SrRNA
分子生物学方法
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一、微生物资源的分布及样本的采集
土壤环境：
少非耐热菌的干扰； ——加入非目的菌的抑制剂；
3、目的菌的充分释放
——使目的菌与样品基质分离：加入活化剂或乳化剂；震荡及超 声波处理，DDC技术；酶法或研磨等组织破碎法；
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三、初筛
设计选择性培养基，稀释涂布，挑选目标菌株。
1、培养基设计原则
合适的营养物质及浓度配比，如不同的C/N源；各无机盐比例适 当；合适的渗透压或水分活度；适宜的pH等；
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2、分离方法介绍
获得微生物纯培养的几种常用方法
(一)固体培养基分离方法 特点：操作简单，是常规方法；
缺点：易因涂布不均使某些部位菌落
1. 涂布平板法 2. 稀释倒平板法
不方能法分：开用，接不菌易环于沾计取数待；分离菌或菌液在 特特注分点点：离：：取平菌是样板落稀液上分释约划离倒0线均.1平分-匀0板.离，2法m；计的l；数变相通对形准式确；；