1、去除蛋白质的方法有哪些
答：(1) 加入与水混溶的有机溶剂；
(2).加入中性盐；
(3).加入强酸;
(4).加入重金属盐;
(5).超滤法;
(6).酶水解法;
(7).加热法.
2、去除蛋白质的意义是什么
答：使结合型药物释放出来，以便测定药物的总浓度；得到较“干净”的提取液，减少乳化；消除对测定的干扰；保护仪器，延长使用期限。

3、:
4、沉淀蛋白中加入甲醇或乙腈的目的是什么
答：加入水溶性的有机溶剂甲醇或乙腈，可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而是蛋白凝聚，是蛋白质结合的药物释放出来。

5、，有机溶剂沉淀蛋白的原理是什么
答：原理是降低水的介电常数，导致具有表明水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。

6、用强酸沉淀蛋白的原理是什么
答：酸沉试剂（高氯酸等）原理是，在低于蛋白质等电点的pH条件下，蛋白质阳离子与沉淀剂的阴离子形成难溶性盐而沉淀，蛋白变性而沉淀。

7、常见蛋白沉淀剂的试剂有：甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、高氯酸、四氢呋喃、
三氯乙酸。

（至少写三种）
8、沉淀蛋白的操作步骤：血浆样品解冻，涡流混匀备用。

在EP管中，依次加
入内标、血浆样品、沉淀试剂，之后涡流混匀，15000 rpm离心5 min，取上清进样分析。

9、用甲醇、乙腈作为沉淀试剂时，血浆与沉淀剂的比例是多少
答：一般用血浆与沉淀剂的比例为乙腈最低1:2（一般1:3以上），甲醇最低1:3（一般1:5以上）。

10、（
11、 简述沉淀蛋白的注意事项（答案开放，仅供参考）
答：（1）涡流混匀一定要充分，至少30 S 以上；
（2）沉淀试剂量一定要足，沉淀要充分。

（3）有时需要考虑溶剂效应，对峰型的影响
（4）热不稳定的药物，离心时需要冷冻离心。

（5）注意操作，防止污染。

12、 比较下面沉淀试剂的沉淀效率：甲醇、乙腈、乙醇、高氯酸。

答：高氯酸>乙腈>乙醇≥甲醇。

表1常见沉淀试剂的蛋白沉淀效率
13、 与液液萃取和固相萃取相比，沉淀蛋白的优缺点是什么（答案开放，仅
供参考）
答：优点：简单、方便、迅速、提取回收率高、成本低、易于操作
缺点：杂质多，对特殊的药物基质效应强。

沉淀剂 · 上清液pH 值 沉淀 mL 血浆中95%以上蛋白时
所需沉淀剂体积（mL ）
三氯乙酸（10%，W/V ） ~
高氯酸（6%，W/V ） <
钨酸
】
焦磷酸（5%,W/V ）
硫酸铜、钨酸钠
氢氧化锌
$
硫酸铵（饱和）
乙腈
丙酮
9-10 乙醇 {
9-10
甲醇
将待测物稀释，不能达到浓缩的作用，待测物含量低时不适用。

上清比较脏，柱压高，有可能会导致系统堵塞。

14、】
15、简述沉淀蛋白的基质效应、提取回收率的操作过程
答：提取回收率（RE）：空白基质，加入沉淀试剂后，涡流混匀，离心。

在上清中加入一定量的的内标和标系，涡流混匀进样。

与QC比较峰面积。

基质效应（ME）：加入内标和标系，加入水（代替空白基质），然后沉淀试剂，涡流，进样。

与上述RE比较峰面积。

16、沉淀蛋白以后，进LC-MS分析，出现哪些情况，需要考虑将上清液稀释答：有溶剂效应，峰型不好；
响应高，最高点可能会导致系统饱和；
基线高，基质效应大（前提是信号响应够）。

17、如果外标响应很高，沉淀蛋白后，响应特别低，怎样判断是共沉淀还是
基质效应导致的
答：沉淀空白基质，在上清中加入内标和标系，看响应，如果响应高，那证明是共沉淀，如果仍没有响应，说明是基质效应的影响。

18、二氯甲烷反提的原理是什么
答：二氯甲烷与乙腈的溶解能力比水强，能将乙腈完全从水相中提取出来。

二氯甲烷将乙腈提取出来，药物留在上层水相，相当于浓缩。

甲醇在二氯甲烷和水中都有一定的溶解，所以反提一般不用甲醇。

19、（
20、二氯甲烷反提时，二氯甲烷的量怎么确定水相在上层还是下层
答：乙腈：二氯甲烷的比例1:3左右。

水相在上层。

21、什么药物适合用二氯甲烷反提
答：一些极性大的，在水相的溶解性强的药物。

22、简述二氯甲烷反提的操作流程。

答：血浆样品室温解冻后，涡流混匀后，精密取内标、血浆样品、乙腈，混匀，离心。

取上清加入二氯甲烷，涡流混合，离心，取上层水相进样。

23、影响沉淀效率的因素有哪些
答：沉淀试剂的选择，沉淀试剂的倍数，涡流时间，离心的转速、时间和温度。

24、甲醇与乙腈沉淀蛋白的现象有什么不同
答：乙腈——块状絮凝物、易于分离；成分损失可能性大。

甲醇——细小颗粒沉淀、不易分离；成分损失可能性小。