急性毒性试验(一)发光细菌法分类号：B4-1主要内容水质急性毒性的测定发光细菌法(GB／T15441-1995)一、填空题1．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441—1995)，若须排除pH影响，应先将水样和氯化钠溶液的pH进行调整，具体为：含铜水样的pH调整为，含其他金属水样的pH调整为5.4，含有机化合物水样的pH调整为。
答案：4.5 7.02．《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T15441-1995)适用于、和实验室条件下可溶性化学物质的水质的急性毒性监测。
答案：工业废水纳污水体3．发光菌急性毒性试验中，样品的急性毒性水平可用相对发光度、或等来表示。
答案：参比毒物氯化汞浓度受测样品的EC50值4．淡水型的发光菌急性毒性试验中，样品的急性毒性水平则用相对发光度、和等来表示。
答案：参比毒物苯酚浓度受测样品的EC50值5．用青海弧菌Q67进行发光菌急性毒性测定时，环境温度在℃之间均可进行，但在测试过程中要求温度波动在±℃内。
答案：18～30 1二、判断题1．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，用发光菌测定样品的毒性非常简便，冻干粉经复苏后即可用于进行样品的测定。
( )答案：错误正确答案为：冻干粉经复苏后，需经质量检验后方可用于进行样品的测定。
2．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T15441-1995)，若须测定包括pH影响在内的急性毒性，不应调节水样pH。
( )答案：正确3．在进行发光菌急性毒性试验中，对含有固体悬浮物的样品须离心或过滤去除，以免干扰测定。
( )答案：正确4．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，氯化汞母液可在2～5℃冰箱里保存6个月，而氯化汞工作液在2～5℃冰箱里只能保存24h。
( )答案：正确5．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，在测定有色样品时，先要进行颜色干扰的校正，计算出因颜色引起的发光量校正值。
( )答案：正确6．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，苯酚溶液的保存和氯化汞溶液相同。
( )答案：错误正确答案为：苯酚溶液的保存和氯化汞溶液不同，苯酚母液可在2～5℃冰箱里保存2d，工作液只能现做现配。
7．EC50值越小，表示受试物的毒性也越小。
( )答案：错误正确答案为：EC50值越小，表示受试物的毒性越大。
8．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，当水样原液的相对强度在50％以上时，可用发光抑制率(％)、EC50值和参比毒物苯酚浓度来表示样品的毒性大小。
( )答案：错误正确答案为：此时可用发光抑制率(％)和参比毒物苯酚浓度来表示样品的毒性大小，而不能用EC50值来表示样品的毒性大小。
9．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，影响发光强度大小除样品的毒性外，还和温度、样品与发光菌的作用时间有关。
( )答案：正确10．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，冻干粉复苏液在复苏数分钟后，在暗室中肉眼应见绿色荧光，否则就不能使用。
( )答案：正确11. 淡水发光菌冻干粉需用0.8％的氯化钠复苏，样品和参比毒物的配制需使用3g／100ml 的氯化钠溶液。
( )答案：错误正确答案为：样品和参比毒物的配制需使用10％的乳糖溶液，样品在测试前应加入乳糖使其浓度达10％。
三、选择题1．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，毒性测定最迟应在采样后6h内进行，否则应在2～522下保存样品，但不得超过 h。
( )A． 12 B．24 C．36 D．48答案：A2．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，发光菌冻干粉在2～5℃冰箱内可有效保存个月而不致失活。
( )A．2 B．4 C． 6 D． 8答案：C3．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，同一批样品在测定过程中要求温度波动不超过±℃。
( )A． 1 B．3 C．5 D．7答案：A4．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)的要求，在制作氯化汞标准曲线时，当氯化汞标准溶液为0.10mg/L时，发光菌的相对发光度为50％，其误差不超过±％。
( )A． 5 B． 10 C． 15 D．20答案：B5．制作淡水型发光菌急性毒性试验的苯酚标准曲线时，其回归方程应符合统计学检验要求(P＜0.90)，并且EC50值应在 mg/L之间。
( )A．50～150 B． 10～100 C． 150～250 D． 100～200答案：D6．青海弧菌Q67冻干粉剂，封存于安碚瓶中，在－18℃以下可有效保存个月而不致失活。
( )A．2 B．4 C．6 D．8答案：C四、问答题1．简述根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)进行发光菌急性毒性试验时，如何设置样品试验浓度组。
答案：(1)探测试验：先按对数系列将样品液稀释成5个浓度：100％、10％、1％、0.1％、0.01％，探测相对发光度落在哪一个浓度范围内。
(2)正式试验：在所落在的浓度范围内再增配6～9个浓度，增配的浓度应倍比稀释，也可通过查对数表，按等对数间距原则自行确定。
2．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)的要求，简述如何对发光菌冻干粉复苏后进行质量检验。
答案：冻干粉复苏2min后即可发光，稀释成工作液后每毫升菌液不低于1.6万个细胞(5m1测试管)或2万个细胞(2m1测试管)(均为稀释平板法测定)。
在毒性测试仪上测出的初始发光量应在600～1900mV之间，低于600mV允许将倍率调至“×2”挡，高于1900mV允许将倍率调至“×O.5”挡。
仍达不到标准需更换冻干粉。
3．发光菌急性毒性试验结果EC50的含义是什么?如果某一样品发光急性毒性试验得出EC50为2.36mg／L,，试解释该结果。
答案：(1)EC50也叫半数有效浓度。
在发光菌急性毒性试验中是指能引起50％发光抑制反应的有效浓度或剂量。
(2)EC50为2.36mg/L表示该样品引起50％发光抑制的浓度为2．36mg/L。
4．用青海弧菌Q67进行发光菌急性毒性测定时，简述如何对测试结果进行质量控制。
答案：(1)样品两次测定结果的相对误差应≤15％，重复测定时应采取第一次测定时使用的发光菌液，即两次测定应采用相同的菌液。
(2)苯酚标准曲线按一元一次线性回归方程进行计算，其抑关率(I)与苯酚浓度(C)之间应符合I=a+bC，回归方程应符合统计学检验要求(P ＜0.90)，并且EC50值应在100～200mg／L之间。
5．用青海弧菌Q67进行发光菌急性毒性测定时，简述如何对样品进行预处理。
答案：(1)水样的预处理：若样品含有不溶性悬浮物，必须静置后取上清液。
有色样品必须稀释至基本无色或使颜色尽量减淡才可用于测试。
测试前加入乳糖使其浓度达10％。
(2)化学品的预处理：化学品需配制成水溶液，测试前加入乳糖使其浓度达10％。
(3)固体废物或污泥样品的预处理：按固体废物：水=1∶5的比例，加入三角烧瓶中，在摇床上振摇8～10h，静止10～14h，取上清液，按水样方法进行。
污泥应尽可能去除水分再称重，否则需先测定其含水率，然后扣除水分后按固体废物的处理方法进行。
参考文献[1] 水质急性毒性的测定发光细菌法(GB／T15441-1995)．[2] 国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会．水和废水监测分析方法．4版．北京：中国环境科学出版社，2002．(二)鱼类法分类号：B4-2主要内容水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法(GB／T13267-1991)一、填空题1．鱼类急性毒性试验中，供试鱼用于试验之前必须在实验室至少暂养 d。
答案：122．鱼类急性毒性试验中，试验用水pH值应在之间。
答案：6.0～8.53．鱼类急性毒性试验中，静态和半静态试验系统最大承载量为 g鱼/L。
答案：1.04．鱼类急性毒性试验中，正式试验开始和结束时，都要测定试验液的pH值、和。
答案：溶解氧温度5．在鱼类急性毒性测定时，可根据被测物质的性质采用式、式或式试验。
答案：静水换水流水6．鱼类急性毒性试验中，试验用水硬度应为 mg／L左右。
答案：2507．鱼类急性毒性测定时，试验期间水温应恒定在±℃。
答案：23 1二、判断题1．鱼类急性毒性试验可用斑马鱼(Brachydaniorerio)作为试验用鱼。
( )答案：正确2．根据《水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》 (GB／T 13267-1991)，鱼类急性毒性试验的试验用鱼在驯养期间应每天三次投食。
( )答案：错误正确答案为：在驯养期间应每周三次或每天投食。
3．鱼类急性毒性试验预试验期间，应每日记录一次试验容器内死鱼的数量。
( )答案：错误正确答案为：应每日至少两次记录试验容器内死鱼的数量。
4．鱼类急性毒性测定时，为保证试验质量，在试验结束时对照组的死亡率不得超过10％。
( )答案：正确5．鱼类急性毒性测定时，试验用鱼应该在连续曝气的水中至少驯养两周。
( )答案：正确6．鱼类急性毒性测定时，配制试验物质储备液所用试剂至少为分析纯。
( )答案：正确7．根据《水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》 (GB／T 13267-1991)，静水试验限于研究那些化学性质不稳定的物质。
( )答案：错误正确答案为：静水试验限于研究那些化学性质稳定的物质。
8．鱼类急性毒性测定时，使用重铬酸钾为参考毒物。
( )答案：正确9．鱼类急性毒性测定时，结果可用直线内插法估算LC50。
( )答案：正确三、选择题1．鱼类急性毒性试验预试验持续时间为 h。
( )A．12～24 B．24～48 C．48～96答案：C2．鱼类急性毒性试验的光照条件为每天 h。
( )A．0～4 B．4～8 C．8～12 D． 12～16答案：D3．在进行鱼类急性毒性试验时，对试验缸中溶解氧的要求是。
( ) A．不低于空气饱和值的40％ B．不低于空气饱和值的60％C．不低于空气饱和值的80％答案：B4．在进行鱼类急性毒性测定时，可进行浓度为 mg／L的极限试验。
( )A． 1 B． 10 C． 100 D．1 000答案：C5．鱼类急性毒性试验开始时，从驯养鱼中随机取出鱼并迅速放入各试验容器中，同一试验的所有试验用鱼应在 min内分组完毕。
( )A． 15 B． 30 C． 45 D. 60答案：B6．鱼类急性毒性测定时，试验鱼在驯养期间死亡率不得超过％。
( )A． 5 B． 10 C． 15 D．20答案：B7．鱼类急性毒性测定时，试验液中的溶解氧应不少于 mg/L。
( )A．4 B． 6 C． 8答案：A8．鱼类急性毒性测定时，换水式试验需 h更新一次试验液。