Company Logo

Company Logo

Company Logo

LOGO

Company Logo
5、微生物的恒温培养

Company Logo
5、微生物的恒温培养

Company Logo

Company Logo

Company Logo
WARNING警告: 警告: 警告
二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时 擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会 腐蚀容器和管道。 三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以 下。 四．绝对不许擅自改造这个产品。 五．不要在爆炸性气体附近使用该仪器。
Company Logo

Company Logo
无菌技术操作原则 （一）操作前准备
无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面， 30分钟通风 1：无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面，减少走 以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 动，以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 宽敞。 宽敞。 操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、 2：操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、戴 无菌手套。 无菌手套。 操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、 3：操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、手链 等手上的饰品
培养基的配制与纯种分离
09工业环保与安全技术 工业环保与安全技术
LOGO
原理:
1.单个微生物过小,一般采取菌落培养 法进行培养观察. 2.由于不同的微生物生长环境不同,种 群间有明显界限.一个菌落可认为是同 一菌种的集合.

Company Logo
选择培养基

Company Logo

Company Logo

Company Logo
2.灭菌与消毒
灭菌与消毒： 实验中所用于培养的培养基和接种等 用到的器具都需要进行灭菌，灭菌的方法 常用的有高压蒸汽灭菌和干热灭菌。 接种时，手需要用70%酒精消毒，接种 环或接种针需要灼烧灭菌。接种时，保持 在火焰周围（火焰周围5cm处）。 用于微生物培养与接种的区域需要用 紫外灯进行杀菌。
Company Logo

Company Logo

Company Logo

Company Logo

烘干锅内物）
10.取物（若发现包装被破坏，则需重新灭菌） 11.放水
Company Logo
WARNING警告: 警告: 警告
一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性 材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会 导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 危险物品清单： 1.爆炸物质 2.可燃性物质 3.氧化剂 4.易燃物质
最常见的就是用培养皿，培养基中加 入琼脂，倒成平板，可用来筛选、计 数、鉴别、菌种复壮等。 还有液体摇瓶培养，这个一般用于扩 大培养、发酵、产物提取等。 试管斜面，可用于菌种短期保存。

Company Logo
培养条件
恒温生化培养箱 培养时间从几个小时到几天 特殊培养条件，如厌氧

Company Logo
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白 质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜 热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用 于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底go

Company Logo

Company Logo
操作流程
1.检查灭菌锅（清除锅内杂物） 2.加水（加之刻度处，不能少也不需多） 3.放入待灭菌物（不能太拥挤，盖上锅盖是，对角线旋紧螺丝） 4.接通电源（插座电源和灭菌锅电源同时打开） 5.放气（排除空气，知道有持续蒸汽排出为止） 6.升压（关掉排气阀门，使压力指针升至1.05kg/cm2 ，121℃） 7.保持（控制电源开关或者设定程序保持在121℃，30min） 8.降压（关电源） 9.烘干（等压力降至0后，打开螺丝，让锅盖移出部分空隙，让蒸汽

Company Logo
干热灭菌
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等， 试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170 ℃ ）加热灭 菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白 质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝 固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180 ℃ ； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70℃时才开箱门。
常见的，培养细菌用肉汤培养基，培 养放线菌用高氏一号培养基，培养真 菌用马丁氏培养基。
具体看培养的菌种和用途，去查阅相关资 料，比如一些实验指导教材、专门的著作 或手册等。各种培养基的配方、用量、适 合培养什么菌，都可以查得到的。

Company Logo
培养 方法

Company Logo
基本操作程序
培养基的配制 灭菌 倒平板
微生物接种 恒温箱中培养
培养基的配制 菌种保存

Company Logo
操作内容
1.根据配方配制100ml牛肉膏蛋白胨培养基，溶解，调pH 值后，分装在三角瓶中，加塞包扎。 2.分装约50ml蒸馏水在三角瓶中，加塞包扎。 3.包装5个培养皿，待用。 4.将以上物品置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。121℃，20min。 5.检查桌面用品是否齐全。 6.等灭菌锅压力将为0后，打开灭菌锅。烘干培养皿，适当 6. 0 冷却培养基与无菌水。 7.在酒精灯火焰5cm内倒平板，待冷却后，倒置。 8.将土壤样品置于冷却后的无菌水中，摇匀。 9.在酒精灯火焰5cm内，用接种环划线分离菌株。 10.倒置培养于培养箱内。

Company Logo
无菌技术操作原则
（三）无菌物品保管 三
1：无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内， 2：无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内，无菌包外要注 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 3：定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。
Company Logo
无菌技术操作原则
（二）操作中保持无菌
1：工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上，不 工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上， 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、打喷 嚏。 用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 2：用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用，防 止交叉感染。 止交叉感染。 无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 3：无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 应予更换或重新灭菌
Company Logo
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌法 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌 效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭 菌的物品放在高压锅内，加热时蒸汽不外溢，高 压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在 103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到 121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、 生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器等物品 的灭菌。