小鼠血液淋巴细胞流式分型
1. 在每个肝素抗凝管中分别加入200ul全血。

2. 每个肝素抗凝管中加入50ul的荧光标记的流式抗体（抗体用PBS 缓冲液稀释成合适的浓度）；并用枪头轻轻混匀。

3. 避光冰浴30分钟。

4. 每管分别加入2-3ml RBC lysis Buffer（之前预热恢复至室温），混合均匀。

5. 室温避光孵育3分钟，待样品透明后，4度2000rpm离心4分钟，并弃去上清。

7. 用2ml PBS缓冲液洗涤细胞一次。

8. 0.5mlPBS重悬细胞后上流式仪检测。

9. 试验结果分析。

（注：若要对多个细胞表面抗原进行多色标记，则同时加入荧光标记抗体后按以上操作步骤进行孵育和细胞洗涤；操作尽量保持在避光条件下进行）
流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞
T淋巴细胞包含有不同的亚群，其中较为重要的有：CD广(总T细胞)、CD广(辅助与诱导T细胞)、CD 广(抑制与细胞毒T细胞)。

它们在不同情况下产生的调节因子和趋化因子有所不同。

[检测方法] 流式细胞术(FCM)
[方法学原理] 利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。

待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。

[标本准备] EDTA抗凝静脉血2ml。

[试剂] 不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，荧光微球。

[仪器] 流式细胞仪
[检测步骤]
1．100u1抗凝血加20ul荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。

2．避光室温作用20rain溶去红细胞后，固定剂固定。

3．上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，设定阳性参数值，计算机将读出阳性值。

[正常参考值]
CD3+：60％一85％
CD4+：28％一58％
CD8+：19％～48％
CD4+／CD8+ 细胞比值：0．8～2．0
[注意事项]
1．为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。

2．每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。

[临床意义] T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。

在感染性疾病中，因为CD4+T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+T细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。

而CD4+T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。

CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+T 细胞常升高。

CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。