用分光光度计测定质粒DNA的浓度
一、目的
熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。

二、原理
DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm 处。

波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。

对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu底物不同有差异）
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。

一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。

经验值：
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜1。

6，表明有蛋白质、酚等污染）
纯RNA：＜OD260/OD280＜（＜时表明有蛋白质或酚污染；＞时表明可能有异硫氰酸残存）
若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。

三、材料、试剂及器具
1、材料
提取的PUC19样品、PUC19标准样品
2、试剂
灭菌重蒸水，TE缓冲液
四、操作步骤
1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.
2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。

3、设定狭缝后校零。

4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE缓冲液稀释至1000μl）后，记
录编号和稀释度。

5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。

6、设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。

7、计算待测样品的浓度与纯度。

DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000
RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
PS：对于一般的紫外分光光度计，若用1cm的石英比色皿，则至少稀释到3ml，才能达到光照高度的量。

根据上述材料的描述，
1、取DNA5μl，用水或TE（DNA用什么溶的就选择什么稀释）稀释至3Ml.稀释倍数则为600.
2、分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值
3、
（1）计算DNA纯度：OD260/OD280
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜1。

6，表明有蛋白质、酚等污染）
（2）计算DNA浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000。