戊二醛 CH2
C
O
H
包埋剂: 环氧树脂(万能胶)
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不使用超薄切片的
透射电镜技术
负染法和投影法
负染法是在将颗粒和纤
维样品分散在具有亲水性支 撑膜的载网上以后，滴加磷 钨酸或醋酸双氧铀等染料， 并随即吸去多余的染液。样 品干燥后残余染料将沉积在 样品的周围以及样品的凹陷、 空隙处，而样品本身反而呈 浅色，故称为负染。
把放射性前体(例如3H-胸苷、14C-尿苷和
3H-亮氨酸分别是DNA、RNA和蛋白质合成的前
体)加到细胞中，使放射性前体与已存在的前体
分子混合，因为它们原子之间仅是原子核重量
不同，而化学性质相同，这样，细胞就以同样
方式对其产生反应。
蛋白质
3H-亮氨酸
细胞
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2.3.3. 放射自显影技术
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首页 用超速离心机分离细胞器和大分子
用制备超速离心机可从细胞匀浆的混合物中分 离出细胞的各种组分。
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首页 离心级段
图解表示如何用递增的速 度反复离心、分离纯化细胞提 取液较小的细胞组分一般要求 巨大的离心力速度才能沉淀。 图中备个离心级段的典型数值：
低 速： 1000g l 0分钟 中 速： 2000g 20分钟 高 速： 80000g 1小时 超高速：150000g 3小时
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首页 复型和冷冻蚀刻技术
升华后，细胞内外
凡空隙处或含游离水较 多的地方将下陷，从而 除上述膜的脂质面外， 其他一些结构也被显示 出来，并进一步增强了 断面的浮雕效果。
细胞核 细胞质 小泡
对这一断面进行铂碳复型，在腐蚀性溶液 中除去生物材料后，即 可上电镜观察。
线粒体
质膜
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细胞融合 杂种细胞
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首页 2.4.1. 单克隆抗体
单克隆抗体技术的基本原理：
A.获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞。
B.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞 二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。
这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具 有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞 能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融 合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇 的特异单克隆抗体。
{ B电子显微镜：
---高压电镜（100WV）
扫描式电镜---普通扫描电镜（SEM）
---隧道扫描电镜（STM）
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2.1.1光学显微镜
2.1 显微镜技术
光学显微镜的最小分辨距离是0.2微 米。实际上，大约0.5微米大小的细菌 和线粒体 ，是光学显微镜能清晰看到 的最小物体。由于光的衍射作用，看不 清更小的物体。
显微放射自显影图
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用3H-TdR （氚-胸苷） 标记3T3细胞20分钟，洗 去放射同位素，涂布核乳 胶，在暗处（4℃）曝光， 再进行显影、定影处理。 掺人3H -TdR的细胞（正 在进行DNA合成的细胞） 的核中有黑色银粒。细胞 经吉姆萨染色
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首页 2.4. 细胞及其组份的分离和纯化
最高级尖端的细胞分离技术是用荧光染料偶联的 抗体标记细胞，再用流式分选计来分选出标记或未被 标记的细胞。
显微镜的种类
★用光源不同分：A光学显微镜：用普通光源（包括可见光、
{
紫外光、激光）
B电子显微镜：用电子束代替光源 ★用途不同分：
{ A光学显微镜：普通光学显微镜，又称复式显微镜 特殊用途光学显微镜：相差显微镜 荧光显微镜 暗视野显微镜 倒置显微镜 激光共聚焦扫描显微镜
透射式电镜---普通透射电镜（TEM）
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流式细胞分选计
流式细胞分选计的图解
当水滴通过高压偏转板 时，带电荷的水滴偏转， 这样就达到了细胞分选的 目的。仪器可给水滴充正 或负电荷。所以可同时分 选出二种不同类型的细胞。
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首页 目录
应用范围 流式细胞技术在细胞
生物学研究以及基础和临床 医学研究工作中都有广泛的 应用，如增殖细胞群体的细 胞周期分析、细胞分化、细 胞凋亡的检测、细胞免疫表 型的分析、各种免疫细胞活 化的检测、外周血淋巴细胞 表型分析、白血病细胞免疫 诊断和造血干细胞分析等。
一固体物的边缘时，在高倍放大情况下所观察到的 干涉效应
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首页 2.1.1光学显微镜
1. 用有机染料对不同细胞组分进行选择性染色能 显示出细胞中特殊部分如核或膜。
原核细胞
植物核细胞
真核细胞
变形虫
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首页 2.1.1光学显微镜
2.细胞荧光技术:用荧光显微镜可观察细胞中的 荧光。细胞荧光技术在现代生物学中已被广泛 应用。
激光扫描共焦显微镜
普通光学显微镜
摇蚊的多线染色体
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首页 2.1.4 电子显微镜
透射电子显微镜 与电镜相关的技术
扫描电子显微镜
超薄切片技术 负染法和投影法 复型和冷冻蚀刻技术
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透射电子显微镜
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与电镜相关的技术
超负 薄染 切法 片和 技投 术影
法
复 固型 定和 技冷 术冻
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2.1.2.2 细胞数字图像处理技术
Cells Division
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2.2细胞化学技术
一、酶细胞化学技术
（一）、固定 根据实验要求和组化反应，选择最佳的固
定方法和固定剂
（二）、显示方法 1. 金属沉淀法：利用金属化合物在反应
过程中生成有色沉淀，借以辨认所检查 的物质或酶活性。有色沉淀，而显示出 酶活性。 2. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而 使脂类显色。 3. 茚三酮反应：显示蛋白质。 等等
NIH 3T3 cells labeled with the green-fluorescent
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3.用相差显微镜和微分干涉差显微镜可直接从 显微中观察未经固定和染色的活细胞。
通暗过视活野细显胞微的镜光: 照的明相的位 发光生线了直变接化光，线相不差能和进微入分物干镜， 涉只差有显散微射镜光可进使入光物相镜位，变这化样 转就变观为察振到幅暗变背化景，中产发生亮高的反 差细影胞像结。构。
图解说明如何用抗体定位样品中的特殊分子，以便用显微镜观察
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利用抗体示踪细胞分子
用荧光标记的抗管蛋白 抗体进行免疫荧光染色
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绿色荧光标记示染色体随体
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2.3.利用放射性同位素和抗体示踪细胞分子
2.3.1 放射性原子能被高灵敏地检测出来
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2.3.2 利用放射性同位素示踪细胞和有机体中的分子
首页 第二章 细胞生物学的研究方法
细胞生物学的许多进展，尤其是近年来振奋人心的 发展，都是由于引入新研究方法的结果。
2.1 显微镜技术 2.2 细胞化学 2.3 细胞及其组份的分离和纯化 2.4 细胞培养技术
2.5分子生物学方法
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首页 2.1 显微镜技术
一个典型的动物细胞，直径为10~20µ m， 比人肉眼能见到的最小颗粒还小5倍。
经负染的肌动蛋白丝
超薄切片技术
复型和冷冻蚀刻技术
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首页 负染法和投影法
分离的质粒
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投影法是把分散有样品的
载网置于真空罩中，使铂或钯 等重金属受热蒸发。金属颗粒 以一个倾斜角度直进地落到样
品表面。这样，随着样品的起 伏，各处的重金属呈现不同的 密度，造成一个反映立体形貌 的像。
超薄切片技术
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首页 2.1.1光学显微镜
50µ m
用4种不同的光学显微镜技术所观察到的培养中的成纤维细胞
（A）光直接通过细胞所呈的影像。 （B）相差显微术
（C）微分干涉差显微术
（D）暗视野显微术。
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2.1.3激光扫描共焦显微术
(Laser scanning confocal microscope, LSCM)
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首页 2.3. 细胞培养
用培养细胞所进行的实验，通常称为in vitro （即在玻璃容器中）。
细胞系
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杂种细胞
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常用的细胞系
细胞系 细胞类型及来源
细胞系 细胞类型及来源
3T3 成纤维细胞(小鼠)

PTKl 上皮细胞(袋鼠)
BHK-21 成纤维细胞(叙利亚仓鼠) L6
成肌细胞(大鼠)
扫描电子显微镜
Skin-scanning
蛙内耳毛细胞扫描电镜投影图
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扫描电子显微镜
Skin-scanning
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2.1.2 细胞的电子影像技术
2.1.2.1 视频反差增强显微技术 (Vido enhancemed contrast microscopy, VEC)