实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色 为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示 十位，两种颜色可编1～99号。 方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢 染色，分别为2～10号。
同一品系的实验动物、用相同染毒条件所得 到的LD50值相同或相似，但其毒作用带或致 死剂量范围却有明显的不同，表明化学物的 实际毒性存在差异。


急性毒性试验不等于LD50测定
可用少量动物测定ALD，并进行临床观 察、化验检查和病理学检查 当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于 2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不 必准确的测定LD50
20只小鼠按随机区组设计分组表
随机分配到各组的动物
剂量选择及分组

剂量选择
广泛查阅文献资料，估计毒性中值
预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
剂量分组
i＝lgLD100-lgLD0/n-1 或i＝lgLD90-lgLD10/n-1 n：设计的剂量组数
实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响；
原则：按统计学原则随机分组，使非处理
因素最大限度地保持一致，提高每组实验
动物间的均衡性。 常用方法：完全随机和随机区组
完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。如将 ２０只动物分为４组，从随机数字表的第 １１行开始，顺序取２０个数字，用４除 的余数即为组别。
20只动物的完全随机分配
完全随机分配后各组所属动物号
20只动物完全随机分配的结果
20只动物的完全随机分配
动物编号 随即数字 除4后余数 所属组别 1 54 2 2 83 3 3 80 0 4 53 1 5 90 2 6 75 3 7 53 1 8 78 2 9 93 1 10 47 3 11 72 0 12 09 1 13 54 2 14 66 2 15 95 3 16 44 0 17 68 0 18 67 3 19 67 3 20 86 2
③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、 排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。

体重：隔日测量 死亡和死亡时间 病理学检查及其他指标
LD50的计算

LD50测定是以动物死活为指标的质反应，当
死亡呈正态分配时，一般具有以下特点：

剂量对数值与动物死亡频数之间为正态分
布曲线关系；


剂量对数值与死亡率之间为正“S”型曲线；


FDA认为评价外源化学物的急性毒性时，应
在LD50值之外加上急性毒作用带或其斜率进 行综合评价，LD50及其斜率在化学物的急性 毒性评价中是必不可少的。

化学物急性毒性的报告应详细描述：

中毒症状及程度
出现症状的时间
死亡前的症状及死亡时间


存活动物的体重变化
死亡动物的病理变化
4种不同外源化学物的 毒作用带斜率比较
急性毒性试验项目

急性半数致死量测定
半数耐受限量测定
7d喂养试验
其他：近似致死量试验、固定剂量法、 急性毒性分级法、阶梯法、金字塔法、 限量试验、急性系统毒性试验等。
急性毒性试验设计
实验动物选择 品种 品系 个体 性别 年龄
原则
体重 生理病理状况 对外源化学物毒性反应与人近似； 易于饲养管理，方便实验操作； 易于获得，品系纯化，价格低廉。
染色法
优点：
简单方便，不痛苦，无损伤。 缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
耳缘孔口法： 在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨 汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱 落，这种标号亦可标号１～９９。 适用于大、小鼠。
烙印法：
将铸铁号码加热后，在动物体表部位烧烙，以 破坏毛囊，留下印记。适用于大动物。 挂牌法： 用金属或塑料制成号牌，固定在动物的耳部或 系于其颈部。适用于较大动物。
二
三
四
一
二
三
一
二
一
三
四
一
二
二
三
四
四
三动物号
组别 动物编号
一
二
4
1
7
5
9
8
12
13 20 14
三
四
2
3
6
11
10
16
15
17
18
19
20只动物完全随机分配的结果
组别 动物编号
一
二 三 四
4
1 2 3
7
5 6 11
9
8 10 16
12
13 15 17
19
14 18 20
随机区组设计
从实验数据可计算LD50以外的其它信息。
曲线：中间高、 两侧低，右侧 延长较远
正态曲线
中点
剂量
对数剂量
中点

计算LD50的常用方法:

概率单位法
Bliss法 改良寇氏（Kä rber）法等


LD50的计算公式
校正公式
LD50的标准误
LD50 的95 %可信限
LD50 的95 %可信限
=log-1(log LD50±1.96×Sx50)
实验动物的年龄与体重的关系
动 物 大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3
体重（克） 寿命（年） 150 2~3
2
15 2~3
2
250 6~8
3~4
3~4
3~4
1.5kg 7~15kg 1kg 4~9 15~20 10~12
急性毒性试验的动物体重



大鼠 120～150ｇ 小鼠 18～22ｇ 豚鼠 200～250ｇ 家兔 2～2.5 kg 犬 10～15kg（成年） 变异范围不得超过所用动物平均体 重的10％。




i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 Xm—最大剂量对数 P—各剂量组死亡率(死亡率均用小数表示) Pm—最高死亡率 q—各剂量组存活率，q=1-p Pn—最低死亡率 ∑p—各剂量组死亡率之和 n—各组动物数 Sx50—logLD50的标准误

寇氏原法：要求最小剂量的反应率（ P ）为 0 ％，最大剂量反应率（ P ）为 100 ％，结果才 精确。
i：组距，相邻两个剂量组对数剂量
之差
受试物的配制
溶剂的选择 配制方法 等容量稀释 等浓度稀释

受试物的配制
等容量稀释：
要求不同剂量组实验动物单位体重所 给受试物的体积相同时，就将受试物 配成不同浓度。等比稀释法（1：k）
等浓度稀释： 将受试化学物配成一种浓度，不同剂 量组实验动物单位体重所给受试化学 物的体积不同。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
急性毒性试验目的



了解外源化学物急性毒性的强度，求出LD50 了解外源化学物毒作用的性质、毒效应的特征 及可能的靶器官，初步评价外源化学物的危险 性。 探求外源化学物的剂量 - 反应（效应）关系， 为亚慢性毒性、蓄积毒性和慢性毒性及特殊毒 性试验染毒剂量的设计和观察指标的选择提供 参考。 初步了解动物致死的原因，为研究毒作用的机 制提供线索，进而为制定中毒急救治疗措施提 供依据。
试验期限及观察指标

观察期限为7~14d
求LD50时，目前国内外一般要求计算实验动
物接触外源化学物后14 d内的总死亡数

对于速发性死亡的化学物也可只计算24 h的
死亡数，如久效磷24 h与14 d的LD50没有差
别
观察指标

中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声；
② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失 调、姿态异常；
急性毒性试验方法
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或 24 h
之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经
口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。

改良寇氏法只要求在最小剂量时 P≤0.2 ，最
大剂量p≥0.8即可。还要求每个剂量组的组间
距呈等比或剂量对数等差，每个剂量组动物数
相等，中间剂量接近于LD50。
九灵胃康在小鼠的经口急性毒性试验结果

LD50=log-1[0.8859-0.11(2.8-0.5)] = log-10.6329
=4.29 （g/kg）

消耗动物量大
获得的信息有限

动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、
血液学和其它化验检查所提供的毒性信息

有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得 的LD50是近似值

LD50所表达的是50%动物存活与50%动物死
亡的点剂量，是一个质的现象，而在实际工
作中，往往发现有些外源化学物用同一物种、
急性毒性试验的动物要求

动物数量：小动物4～6组，每组至 少10只；犬等大动物每组6只。 性别：雌雄各半，也有例外，如， 致畸试验的剂量准备，只作雌性动 物LD50。
年龄：刚成年，未曾受孕、交配


实验动物的标记