科研论文格式写作2008-05-06 10:17:52 阅读168 评论0字号：大中小一、开题报告：1.选题意义2.国内外文献综述3.写作框架：｛三段论：①问题；②原因；③对策、建议、措施｝4.正文：①标题：｛不能超过20个汉字，超过后要用副标题｝——副标题：｛（以……为例）或（据＊＊＊统计…而得）｝②作者：｛１～３个作者为宜｝③作者单位：｛单位全称，所在省城市邮政编码｝④摘要：｛用第三人称写法（不以“本文”、“作者”等为主语，可用“文章”），200字之内｝⑤关键词：｛3-5个，中间用分号相隔｝⑥英语翻译：｛翻译①②③④⑤部分｝⑦正文：｛结构要严谨，表达要简明，语义要确切，论点要鲜明，论据要充分，引用要规范，数据要准确，层次不宜过多，层次序号为：一、（一）、1、（1）、1）｝⑧参考文献：｛文献类型标识，如专著：[M]；论文集：[C]；报纸文章：[N]；期刊文章：[J]；学位论文： [D]；报告：[R]；标准：[S]；专刊：[P]；统计年笺：[Z]｝a论文集格式：作者．题名[文献类型标识]．编者．文集名．出版地：出版者，出版年．b期刊文章格式：主要责任者．题名[文献类型标识]．刊名，年，卷（期）．c报纸文章格式：主要责任者．题名[文献类型标识]．报纸名，出版日期（版次）．d网站格式：URL网址名称◆同一专著、论文集、期刊、报纸文章，都一律只用一个序号，而且要把页码统一标注在文章中相应序号之后。
⑨作者简介：｛作者姓名（出生年—）、性别、民族（汉族可省略），籍贯（省、市或县）、现供职单位全称及职称、学位、研究方向、联系方式｝二、论文级别：1.一般刊物：｛省级、国家级｝2.核心刊物：｛省级、国家级｝SCI｛［Science Citation Index］（科学引文索引）｝SSCI｛［Social Sciences Citation Index］（社会科学引文索引）｝CSSCI｛［Chinese Social Science Citation Infoemation］（中文社会科学引文索引）｝EI｛［The Engineering Index］（工程索引）［English Index］(英文索引)或(英文简缩)｝三、注释：｛用于对文内某一特定内容的解释或说明，其序号为：①②③……，注释置于页脚｝标题作者（单位全称，所在省城市邮政编码）【摘要】：……【关科研论文格式写作2008-05-06 10:17:52 阅读168 评论0字号：大中小一、开题报告：1.选题意义2.国内外文献综述3.写作框架：｛三段论：①问题；②原因；③对策、建议、措施｝4.正文：①标题：｛不能超过20个汉字，超过后要用副标题｝——副标题：｛（以……为例）或（据＊＊＊统计…而得）｝②作者：｛１～３个作者为宜｝③作者单位：｛单位全称，所在省城市邮政编码｝④摘要：｛用第三人称写法（不以“本文”、“作者”等为主语，可用“文章”），200字之内｝⑤关键词：｛3-5个，中间用分号相隔｝⑥英语翻译：｛翻译①②③④⑤部分｝⑦正文：｛结构要严谨，表达要简明，语义要确切，论点要鲜明，论据要充分，引用要规范，数据要准确，层次不宜过多，层次序号为：一、（一）、1、（1）、1）｝⑧参考文献：｛文献类型标识，如专著：[M]；论文集：[C]；报纸文章：[N]；期刊文章：[J]；学位论文： [D]；报告：[R]；标准：[S]；专刊：[P]；统计年笺：[Z]｝a论文集格式：作者．题名[文献类型标识]．编者．文集名．出版地：出版者，出版年．b期刊文章格式：主要责任者．题名[文献类型标识]．刊名，年，卷（期）．c报纸文章格式：主要责任者．题名[文献类型标识]．报纸名，出版日期（版次）．d网站格式：URL网址名称◆同一专著、论文集、期刊、报纸文章，都一律只用一个序号，而且要把页码统一标注在文章中相应序号之后。
⑨作者简介：｛作者姓名（出生年—）、性别、民族（汉族可省略），籍贯（省、市或县）、现供职单位全称及职称、学位、研究方向、联系方式｝二、论文级别：1.一般刊物：｛省级、国家级｝2.核心刊物：｛省级、国家级｝SCI｛［Science Citation Index］（科学引文索引）｝SSCI｛［Social Sciences Citation Index］（社会科学引文索引）｝CSSCI｛［Chinese Social Science Citation Infoemation］（中文社会科学引文索引）｝EI｛［The Engineering Index］（工程索引）［English Index］(英文索引)或(英文简缩)｝三、注释：｛用于对文内某一特定内容的解释或说明，其序号为：①②③……，注释置于页脚｝标题作者（单位全称，所在省城市邮政编码）【摘要】：……【关键词】：……【英语翻译】：……正文：……【参考文献】……【作者简介】……自身免疫性感音神经性聋基因治疗的实验研究发表时间：2009-6-5 14:45:50 浏览次数：174 来源：中国创新医学网推荐蔡文君，谭长强，李玉瑾，黄和，李霜南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科暨耳鼻咽喉科学研究室，江苏南京 210029；南京工业大学生物化学中心，江苏南京 210009【摘要】目的：研究以重组复制缺陷型腺病毒为载体的Fas配体（Fas Ligand，即FasL）基因和白细胞介素10（即IL10）基因治疗实验性自身免疫性感音神经性聋。
方法：采用同种内耳组织抗原加弗氏佐剂免疫豚鼠，造成自身免疫性感音神经性聋的动物模型28只，按配对设计将其分为4组，通过鼓阶微量注射的方式，A组注入携带FasL基因的腺病毒（Ad FasL），B组注入携带IL10基因的腺病毒（Ad IL10），C组单纯注入腺病毒（携带绿色荧光蛋白，即Ad GFP），D组注入等量的磷酸盐缓冲液。
基因导入7 d后行听觉脑干诱发电位（ABR）测试，后取颞骨制作石蜡切片并行HE染色和光镜观察，每组各取两耳行螺旋韧带和基底膜透射电镜观察。
每组各取3只（6耳）行免疫荧光和酶免疫组织化学试验，以检测基因产物表达和腺病毒转染情况。
结果：免疫组织化学显示携带目的基因的腺病毒可以转染血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节、蜗轴小血管周围及其耳蜗的骨壁等部位的细胞，并产生相应的蛋白产物（IL10和FasL）。
ABRⅢ波阈值的均值对比结果显示，A组和B组明显低于C组和D组。
内耳组织的免疫炎性反应亦明显较C组减轻。
结论：重组复制缺陷型腺病毒可以携带目的基因转导入内耳，并在内耳表达基因产物，其抑制炎症反应的作用可有效地减轻自身免疫性感音神经性聋的内耳组织免疫炎性损伤和听觉功能障碍，有望成为治疗自身免疫性感音神经性聋新的方法和途径。
【关键词】基因治疗；自身免疫性感音神经性聋；豚鼠1979年McCabe依据其临床发现，即18例听力障碍患者经过免疫抑制治疗后听力有明显改善，提出了自身免疫性感音神经性聋(autoimmune sensorineural hearing loss，ASNHL)的概念。
之后的进一步研究发现，自身免疫性损害不仅可累及耳蜗，还可波及前庭，故又提出了自身免疫性内耳病（autoimmune inner ear disease，AIED）［12］概念。
目前ASNHL的病因和发病机制尚不十分清楚，临床缺乏特异性诊断方法，对于ASNHL患者的治疗亦存在着一些问题，主要是采用皮质激素或免疫抑制剂治疗，虽然疗效较快、较好，但该类药物毒副作用多，而且还存在停药后复发率较高等问题。
近年来随着分子生物学研究的深入和基因工程技术的进展，基因治疗已成为许多相关疾病治疗研究方面的热点和新希望。
基因治疗是根据特定的治疗目的基因将DNA导入到宿主细胞中并在其中表达。
1996年Lalwani等［34］报道了将基因导入动物内耳，以后关于内耳的基因治疗成为一个热点，并在载体选择、导入方法和安全性评估等方面取得了很大的进步。
基因工程技术已能构建特异性载体，可携带治疗基因导入动物耳内，在动物内耳获得高效表达［4］，产生具有高度生物活性的稳定的基因产物，并且不产生病毒相关的耳毒性反应，这为基因治疗感音神经性聋提供了生物学证据。
目前因为复制缺陷性腺病毒载体具有病毒滴度高、转染效率高（100%）、宿主细胞范围广、外源基因容量大、稳定和无插入突变危险等特点，已经成为基因转导研究中应用最多的载体之一。
Yagi等［5］将腺病毒携带的GDNF基因从圆窗膜注射入鼓阶，GDNF基因在蜗内得到表达并发挥作用。
基于上述研究状况和现有研究工作基础，本项目组拟将利用基因治疗的独特性和内耳可行局部治疗的独特解剖特点，对自身免疫性感音神经性聋模型动物进行内耳免疫抑制或调节基因的试验性治疗研究，以探讨其治疗效果和可能发生的副反应情况。
1 材料和方法1.1 实验动物健康成熟豚鼠，白色红目，体重300 g左右，耳廓反应正常，耳镜检查排除中耳疾患，所有动物均由南京青龙山养殖场提供。
1.2 内耳组织粗制抗原（crude inner ear antigens，CIEAgs）制备豚鼠CIEAgs制取方法参考文献［4］，主要步骤：将豚鼠清醒断头，取出颞骨，快速打开听泡，在解剖显微镜下分离全膜迷路，包括基底膜、螺旋韧带、膜半规管、椭圆囊和球囊（祛除耳石器），放入0.01 mol·L-1 pH 7.4 PBS中，经研磨、冻溶、超声粉碎、匀浆、离心（1 000 r·min-1，5 min）后取上清液，采用紫外分光光度计测定蛋白含量，分装后低温干燥制成CIEAgs干粉备用，保存于-80 ℃冰箱。
1.3 ASNHL动物模型制备首次免疫每只动物采用CIEAgs 400 mg·（0.4 ml）-1，加等量完全弗氏佐剂，注射于右后足垫；2周后以CIEAgs 200 mg·（0.4 ml）-1加等量不完全弗氏佐剂，注射于背部多点皮下；间隔2周后，再同样强化免疫1次。
依据听觉诱发电位Ⅲ波的阈值升高（超过免疫前全部动物均值加2倍标准差）和出现针对CIEAgs特异性抗体（ELISA法，波长490 nm时A值超过免疫前全部动物均值加2倍标准差），判断为ASNHL模型动物制备成功［6］。
1.4 实验设计ASNHL模型动物共28只，按配对设计分为4组，每组7只：A、B和C组分别向鼓阶内注入携带FasL基因的重组腺病毒(Ad FasL)、携带IL10基因的重组腺病毒(Ad IL10)和携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad GFP)；D组(即对照组)用同样方法仅向鼓阶内注射磷酸盐缓冲液。
1.5 重组基因载体鼓阶内注射末次免疫后2周进行。
豚鼠用1%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（30 mg·kg-1）后，在耳廓后方作一长3～4 cm弧形切口，显露听泡，用微型电钻打开听泡，暴露耳蜗底转，用针尖轻轻磨薄耳蜗鼓阶侧壁的骨壁，钻一针尖大小的孔，用微推进器将小儿头皮针的针尖（针尖斜面已打磨变小）插入鼓阶，深度不超过1 mm，先抽取少量（约10 μl）的外淋巴液，再用微量注射机将重组腺病毒或腺病毒液缓慢（1 μl·min-1）注入鼓阶，A组给予Ad FASL（病毒滴度为2.5×10 10 pfu·ml-1）20 μl，B组给予Ad IL10（病毒滴度为1.0×108 pfu·ml-1）20 μl，C组给予AD GFP（病毒滴度为1.0×109 pfu·ml-1）20 μl，D组给予等量的磷酸盐缓冲液,骨蜡封闭耳蜗底转，抗生素冲洗中耳腔3次，部分局部放置氧氟沙星明胶海绵预防感染。