效果 灭菌 灭菌Βιβλιοθήκη 用途废弃污物、尸体
接种环，试管口
干烤 热
红外线 煮沸法 湿 高压蒸
干烤箱，热空气
160-170º C 2h 电磁波热效应 100º C ， 5-10 分 钟，沸水
高压蒸气灭菌器 103.4Kpa 121.3º C×15-20 分钟
灭菌
玻璃器皿等耐高温的物
品
灭菌
消毒
医疗器械 饮水和食具 耐高温 耐湿物品
抑菌时间可为 2min、5min、 10min、20min相 同条件下作用时 间越长，杀菌率 越低，所以选择 最长的作用时间 来检测抑菌性能 更具有代表性
杀菌
残留消 中和剂法（化学 毒剂的 中合法） 去除方 法不同
抑菌
稀释法（酸碱平衡 法）
评价标 杀菌率≥90%，产 抑菌率≥50%~90%， 品有杀菌作用。 产品有抑菌作用， 准
4冷冻真空干燥保藏法
安瓿管
5液氮超低温保藏法
• 将菌种保藏在超低温（-196℃~-150 ℃ ） 的液氮中，可降低变异率和长期保持原 种的性状。 • 对于冷冻干燥保藏法或其他干燥保藏有 困难的微生物，如支原体、衣原体及难 以形成孢子的小霉小型藻类或原生动物 都可用本法长期保存，这是当前保藏菌 种最理想的方法。 • 保护剂：20%甘油或10%二甲基亚砜 （DMSO）
抑菌的原理
• 4、高渗：通过盐腌和糖渍等高渗措施来保 护食物，是在民间早就流传的有效防霉腐 方法。 • 5、高酸度：在我国具有悠久历史的泡菜， 就是利用乳酸菌的厌氧发酵使新鲜蔬菜产 生大量乳酸，借这种高酸度而达到抑制杂 菌和防霉腐的目的。
• 6、高纯度：用白酒或黄酒保存食品，在我 国有悠久传统，如醉蟹、醉麸、醉笋和黄 泥螺等产品，都是特色风味食品。 • 7、加防腐剂：有些食品、调味剂、饮料、 果汁或工业器材中，可加入可加入适量的 防腐剂或防霉剂来达到防霉腐的目的，如 丙酸（0.32%）或乙二酸（0.32%）来做面 包等的防腐剂。
常见病原菌的灭菌、抑菌、保藏 原理及方法
消毒灭菌
基本概念 消毒（disinfection）：杀死物体上或环 境中的病原微 生物,并不一定杀死细菌 芽胞或非病原微生物的方法。 灭菌（sterilization）：杀死 物体上所 有微生物的方法(包括芽孢)。
一、消毒灭菌的方法
常用的消毒和灭菌方法可分为： 1）物理方法： 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法 2）化学方法 3）生物灭菌法
抑菌率≥90%产品有 较强的抑菌作用
菌种保藏基本原则
1、保藏菌种时首先要选择它们的 休眠体，如分生孢子、芽孢等，并 创造一个低温、干燥、缺氧、避光 和缺少营养的环境条件，以利于休 眠体能较长时间维持其休眠状态。 2、对于不产孢子的微生物，也要 使其新陈代谢处于最低水平，又不 会死亡，从而达到长期保藏的目的 。
3 干燥保藏法 • 基本原理：将微生物赖以生存的水 分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢 停滞状态，从而达到较长期保藏的 目的。低温条件下，保藏期可达数 年至十几年之久。 • 砂土管保藏法、明胶片保藏法、硅 胶保藏法、麸皮保藏法
3干燥保藏法
• 砂土管保藏法—产生芽孢的细菌及 形成孢子的霉菌和放线菌。 • 方法：处理砂土 装沙土管 制备菌液 加孢子液 干燥 收藏 恢复培养 • 明胶片保藏法—细菌 • 制备菌悬液 制备菌液 制备蜡纸 加菌 液 干燥 收藏 恢复培养
化学因素
• 1、表面消毒剂：随浓度递增相继出现制菌 和杀菌作用，形成一个连续的作用谱 • 2、磺胺类药物：抗代谢 • 3、抗生素：在低浓度能抑制和干扰他种生 物的生命活动
杀菌
抑菌
含义 作用 时间
消毒剂对微生物的杀灭能 生物制剂抑制妨 力 碍细菌生长繁殖 及活性的能力
杀菌时间可为2min、 5min、10min、20min 相同条件下作用时间 越短，杀菌率越低， 所以选择最短的作用 时间来检测杀菌性能 更具有代表性
3干燥保藏法
• 硅胶保藏法—丝状真菌。 • 方法：制备硅胶 制备菌液 加 菌液 干燥 收藏 恢复培养 • 麸皮保藏法—产孢子的丝状真 菌。 • 制备麸皮培养基 培养菌种 干 燥 收藏 恢复培养
4冷冻真空干燥保藏法
• 该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥 和添加保护剂等多种有利条件，是微生物 代谢处于相对静止状态。 • 该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、 （除少数不产孢子或只产生丝状体真菌 外）、酵母菌及病毒的保藏。 • 该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一 般可达10~20年），存活率高，是目前最 有效的菌种保藏方法之一。
防腐
• 利用某种理化因素完全抑制霉腐微 生物的生长繁殖，即通过制菌作用 防止食品、生物制品等对象发生霉 腐的措施
化疗
• 指利用具有高度选择毒力，即对病 原菌具高度毒力而对其宿主基本无 毒的化学物质来抑制主体内病原微 生物的生长繁殖，借以达到治疗该 宿主传染病的一种措施
抑菌的方法
• • • • • • • 1、低温 2、缺氧 3、干燥 4、高渗 5、高酸度 6、高醇度 7、加防腐剂
• 杀菌或抑菌，并无绝对界限，常常不易 区分。同一物质，浓度高时可杀菌，而 浓度低时只能抑菌，作用时间长可杀菌 ，作用时间短则只能抑菌。另外，由于 各种微生物性质的不同，同一物质对一 种微生物具有杀菌作用，而对另一种微 生物可能仅有抑菌作用。
抑菌
• 采用化学或物理方法抑制或 妨碍细菌生长繁殖及其活性 的过程。
灭菌
气灭菌
热 法
辐射杀菌法
紫外线（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳杀菌波 长） 杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价 键结合成 二聚 体，干扰DNA复制与 转录，导致细菌死亡 特点： 穿透力弱 适用范围：适于空气和物 体表面消毒
滤过除菌法（filtration） 机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的 细菌除去, 以达到除菌目的 器具：滤菌器（filter） 适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗 生素）以及 空气等的除菌
1.1斜面传代保藏法
• 贴标签：菌种 菌株 接种日期 • 接种：对数生长期后期 成熟的孢子 • 培养： 细菌—37℃，18~24h 酵母—28~30 ℃ ，36~60h 放线菌和丝状真菌—28 ℃ ，4~7d • 收藏：管口面塞用牛皮纸包扎，或用融化 的固体石蜡封棉塞后置4冰箱保存。
1.2半固体穿刺保藏法
2 甘油保藏法 • 方法步骤： • 无菌甘油的制备：80%的甘油在 121℃灭菌20min • 保藏培养物的制备：活化 纯化 性能 检测 制备菌种培养物 • 保藏菌悬液的制备：液体法 菌苔法 -20 ℃保藏 • 快速冷冻；乙醇-干冰 液氮 • 超低温保藏：-70 ℃ 一般细菌、酵母 保存期为3~5年。
1 简易保藏法 • 定期移植时间间隔： • 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； • 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； • 石蜡油封法一般可保藏1年。 • 优缺点：操作简单，可随时观察菌种 生长状况，但较费时费力，因经常移 植传代，微生物物易发生变异。
1 简易保藏法 • • • • • 定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。 优缺点：操作简单，可随时观察菌种 生长状况，但较费时费力，因经常移 植传代，微生物物易发生变异。
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贴标签 穿刺接种：将菌种直刺入直立柱中央 培养：同传代保藏法 收藏：待菌长好后，用浸有石蜡的无 菌软木塞或橡皮塞代替面塞并塞紧， 置4 ℃冰箱中保藏，保藏0.5~1年。
1.3石蜡油封法
• 石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超 过总体积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸 汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后 在40 ℃温箱中放置2周或置105~110 ℃烘箱中烘2h， 除去石蜡油中的水分。 • 培养 • 加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中， 加入量以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约 1cm为宜。 • 收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种 管直立放置于4 ℃冰箱中。 • 放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌 及不产芽孢细菌可保1年。
2 甘油保藏法
• 期长，保存期间取样测试方便，在基因工程 中常用于保存含质粒的菌株，一般可保3~5 年。保护剂： 40%左右的甘油 • 机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入 细胞，使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由 于强烈脱水及胞内形成冰晶而引起的破坏。 • 保藏温度：-20 ℃左右或-70 ℃ • 特点:操作简单，保藏
热力灭菌 原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽链断裂，蛋白 质 变性凝固，核酸解链崩解, 导致细菌死亡。
火焰灼烧
干热灭菌法
烘箱热空气灭菌
高温灭菌
常压 下 湿热灭菌消毒法
LIH法 巴氏消毒 HTST法 煮沸消毒 间歇灭菌 常规加压灭菌
加压
连续加压灭菌法
种类：
常用热力灭菌法
种类 焚烧 干 烧灼
方法 用焚烧炉燃烧 火焰烧灼
低温抑菌法
冷冻真空干燥法： 在低温状态下真空抽去水分
干燥与
用途：保存菌种
（二）化学消毒灭菌法
消毒剂杀菌机理： 1.使菌体蛋白变性和凝固 ： 酚、醇、酸硷、醛 类，重金属盐类（高浓度） 2 .干扰细菌的酶系统（酶失活）： 氧化剂、 重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性 剂
抑菌的原理
• 1、低温：利用4℃以下的各种低温（0， -20，-70，-196℃等）保藏食物等 • 2、缺氧：采用抽真空、冲氮或二氧化碳、 加除氧剂等方法来有效防止食品和粮食等 的霉腐、变质而达到保鲜的目的 • 3、干燥：采用晒干、烘干或红外线干燥等 方法对粮食、食品等进行干燥保藏 • 在密封条件下，也用生石灰，无水氯化钙 干燥
常用菌种保藏方法 1 常用的简易保藏法： 斜面传代保藏法、半固体穿刺保藏法（适 用于细菌和酵母菌）、石蜡油封法 2 甘油保藏法 3 干燥保藏法 4 真空冷冻干燥保藏法 5 液氮超低温保藏法