新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测(圣湘试剂)流程
一、试剂配制:
根据待测样本数量+ 2人份(空白对照和阳性对照)配制试剂:(2019-nCoV-PCR反应液26μl/人份+2019-nCoV-PCR-酶混合液4μl/人),充分混匀成PCR混合液,每一反应管分装30μl配制好的PCR混合液。
二、核酸提取:
1、取出样本释放剂,待平衡至室温后,混匀待用;
2、取出样本后混匀→ 取200μl待测样本于1.5ml离心管中→ 3000rpm离心30s → 另取一新的小EP管中加入30μl样本释放液
→ 分别加入离心后的样本上清30μl → 震荡混匀→ 静置10min → 瞬时离心(样本上清备用)
三、加样:
30μl配制好的PCR混合液+ 20μl样本核酸(空白对照、待测样本、阳性对照)
四、PCR扩增:
50℃30min → 95℃1min →(95℃15s ; 60℃30s)x 45个循环→ 25℃10s。