盐析法沉淀蛋白质的原理
价廉;溶解度大(767g/L);稳定蛋白质; 缺点:水解变酸;高 pH 释氨 ,腐蚀;残留产品有影响。
§ 硫酸钠 § 硫酸镁 § 磷酸二氢钠 § 柠檬酸盐
影响盐析的因素
§ 盐饱和度的影响 § 样品浓度的影响:
• 蛋白质浓度大,盐的用量小,但共沉作用明显,分辨率 低; • 蛋白质浓度小,盐的用量大,分辨率高; § pH 值:影响蛋白质表面净电荷的数量 • 通常调整体系 pH 值,使其在 pI 附近; § 盐析温度: • 一般在高盐浓度下,温度升高,其溶解度反而下降
盐析操作
§ 硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂
§ 采用硫酸铵进行盐析时可按二种方式加入:
1. 直接加入固体(NH4)2SO4 粉末,工业上常采用这种方法,加入速度不能太快, 应分批加入,并充分搅拌,使 其完全溶解和防止局部浓度过高;
2. 是加入硫酸铵饱和溶液,在实验室和小规模生产中, 或(NH4)2SO4 浓度不 需太高时,可采用这种方式,它可防止溶液局部过浓,但加量较多时,料液 会被稀释。
盐析法沉淀蛋白质的原理
概念:
在高浓度的中性盐存在下,蛋白质 (酶)等生物大分子物质在水溶液中的溶 解 度降低,产生沉淀的过程。
盐析法的原理
(1)破坏水化膜 (2)中和电荷
当中性盐加入蛋白质分散体系时可能出现以下两 种情况: (1)“盐溶”现象—低盐浓度下,蛋白质溶解度增大 (2)“盐析”现象—高盐浓度下,蛋白质溶解度随之下降,原因如下: § 无机离子与蛋白质表面电荷中和,形成离子对,部分中和了蛋白质的电性,使 蛋白质分子之间的排斥力减弱,从而能够相互靠拢; § 中性盐的亲水性大,使蛋白质脱去水化膜,疏水区暴露,由于疏水区的相互作 用导致沉淀;
§ 脱盐
• 透析和凝胶过滤