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目录 ❖ 色谱分析法简介 ❖ 色谱法的分类 ❖ HPLC的特点及应用领域 ❖ HPLC的分类 ❖ HPLC相关的基本术语 ❖ HPLC的相关理论
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❖ HPLC的定性分析 ❖ HPLC的定量分析 ❖ HPLC仪器的组成
输液泵 检测器 色谱柱 进样器 工作站
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❖ P230的基本操作 ❖ HPLC方法的建立 ❖ 液相色谱常见问题及其对策 ❖ 液相色谱容易出问题的部件 ❖ 仪器的维修和保养
土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有 机成分
烃类族组成、石油中微量成分
无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、 化妆品、染料
液晶材料、合成高分子材料
无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、 甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳 烃
氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然 高分子化合物
HPLC基础知识 The Basic Knowledge
of HPLC
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概述
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柱色谱 平板色谱
纸色谱 薄层色谱
按分离效率分
经典液相色谱 高效液相色谱
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HPLC的特点
优点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好， 定量精度高，应用范围广
缺点：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分 子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多
分离原理图解
适用于分析高沸点、大
分子、强极性、热稳定 性差的化合物
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“色谱”的来由
❖ 俄国植物学家 茨维特（Tswett） 1906年，他将从植物色素提取的石油醚提 取液倒人一根装有碳酸钙的玻璃管顶端， 然后用石油醚淋洗，结果使不同色素得到 分离，在管内显示出不同的色带，色谱一 词也由此得名
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色谱法的分类
1.按两相状态分类
➢ 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC） 根据固定相是固体吸附剂还是固定液（附 着在惰性载体上的一薄层有机化合物液 体），又可分为气固色谱（GSC）和气液色 谱（GLC）
该法在分离多组分混合物时，除第一组分
外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量
杂质的混合物中切割出一个高纯组分（组分A），
而不适用于对混合物进行分离
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按流动相分
气相色谱（GC） 液相色谱（LC） 超临界流体色谱（SFC）
吸附色谱
按机理分
分配色谱 离子交换色谱
排阻色谱
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按固定相在支持 体中的形状分
最近，又有一种新分离技术，利用不同组 分与固定相（固定化分子）的高专属性亲 和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常 用于蛋白质的分离
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3. 按固定相的外型分类
➢ 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱 ➢ 固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，
它又可分为薄层色谱和纸色谱
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4. 按照展开程序分类
按照展开程序的不同，可将色谱法分为 洗脱法、顶替法、和迎头法 ▪ 洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品 加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力 比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。 由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力 不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同， 从而使组分彼此分离。流出曲线下图
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➢ 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 同理液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和 液液色谱（LLC） 随着色谱工作的发展，通过化学反应将固 定液键合到载体表面，这种化学键合固定相 的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）
➢ 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色 谱（SFC）
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2.按分离机理分类
人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物
化学成分
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HPLC的分类
❖ 高效液相色谱法按照分离机制可以分为以下几类 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 离子交换色谱
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AB
此法适于制备纯物质或浓缩分离某 一组分；其缺点是经一次使用后，柱子 就被样品或顶替剂饱和，必须更换柱子 或除去被柱子吸附的物质后，才能再使 用
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▪ 迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或 溶解能力最弱的组分首先以纯物质的状态流出， 其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二 组分混合物，以此类推。流出曲线如下图
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HPLC应用领域
HPLC是目前应用最广泛的分离方法。已 广泛地用于石油化工、有机合成、生理生 化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生 产在线控制，乃至空间探索等许多领域
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应用领域 环境 农业 石油 化工 材料 食品
生物 医药
分析对象举例
常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害 重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分
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B A
这种方法能使样品的各组分获得良好 的分离，色谱峰清晰。此外，除去冲洗剂 后，可获得纯度较高的物质。目前，是将样品加到色谱柱头后，在惰性 流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力 比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直 接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将 各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依 次顶替出固定相 很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最先 流出，最强的最后流出。顶替法的流出曲 线如下图
➢ 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附 能力强弱不同而得以分离的方法，称为 吸附色谱法
➢ 利用组分在固定液（固定相）中溶解度 不同而达到分离的方法称为分配色谱法
➢ 利用组分在离子交换剂（固定相）上的 亲和力大小不同而达到分离的方法，称 为离子交换色谱法
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➢ 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选 择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱 法或尺寸排阻色谱法
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色谱分析法简介
❖ 色谱法是一种重要的分离分析方法 ，它利 用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分 配系数的微小差异进行分离。当两相作相 对移动时，使被测物质在两相之间进行反 复多次分配，使原来微小的差异累加产生 了很大的效果，形成差速迁移，使各组分 在柱内移动的同时逐渐分离，以达到分离、 分析及测定一些物理化学常数的目的