2.卵清蛋白质的分离 选取鸡、鸭、鹅、鹌鹑等动物的新鲜_卵__清__做 实验材料。采用__电__泳__法分离卵清蛋白质。
想一想 可否利用蛋白质的提取与分离技术快速诊断 早期癌变？ 【提示】 可以。只需从早期患者的尿液、 血液或细胞裂解液中提取少量蛋白质样品,采 用蛋白质指纹图谱技术，就可以更加快速、 简便、准确地对细胞癌变作出诊断。
例1 关于电泳的说法不正确的是( ) A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁 移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极 移动 C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少 D．用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的 电泳迁移率完全取决于分子的大小
【解析】 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁 移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的 大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白 质－SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大 超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖 了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移 率完全取决于分子的大小。
2.电泳 3. 染 色 ： 用 质 量 分 数 为 0.05% 的 _考__马__斯__亮__蓝__R__25_0_染色液对凝胶进行染色。 4.脱色：用体积分数为7%的__醋__酸__溶__液__对凝 胶板进行浸泡漂洗数次，直至底色脱净。 5.制干胶板：将已_脱__色__的凝胶板放在_保__存__液_ 中浸泡3 h～4 h后，放在两层透气的_玻__璃__纸__ 中间自然干燥。
________________________________________ ________________________________________ ___________________________________。
3.结果分析 (1)不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电 场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹，每 一种带纹可能就是一种蛋白质。 (2)如果要对每一条带纹作进一步的研究，只 需将带纹剪下，分别予以洗脱，然后对洗脱 液中的蛋白质做进一步分离。
特别提醒 ①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电 泳速度快，样品不需事先处理。 ②琼脂糖凝胶电泳后区带易染色，样品极易 洗脱，便于定量测定。 ③测定蛋白质相对分子质量通常用SDS－聚 丙烯酰胺凝胶电泳，原因是在一定浓度范围 内聚丙烯酰胺的热稳定性强，可用检测仪直 接测定。
例2 有A、B、C三种蛋白质，在pH为7的 条件下进行电泳，结果如图所示：
请据图回答： (1) 在 pH 为 7 时 ， 带 电 荷 数 最 多 的 是 ____________，最少的是________________。 原因是__________________________________
判一判 (1)蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分 离纯化。(√) (2)在同一个电场电泳后，在凝胶中形成的一 个带纹就是一种单纯蛋白质。(×) (3)在电泳时，应先将稳压稳流电泳仪调到20 ～30 mA，再使样品进入分离胶。(×) (4)分离操作正确的前提下，如果带纹均匀、 狭窄、平整，则说明分离效果比较好。(√)
要点突破讲练互动
要点一 电泳的常用方法 1.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电 荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因 各种分子的带电性质差异、分子大小、形状 不同而不同，从而得以分离。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1)凝胶形成：
(2)加入SDS作用：使蛋白质发生完全变性， 解聚成单条肽链；与各种蛋白质形成蛋白质 －SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超 过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋 白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决 于分子的大小。
第六章 蛋白质和DNA技术
第六章 蛋白质和DNA技术
第1节 蛋白质的提取和分离
学习导航 1.知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。 2.尝试蛋白质的提取和分离。 [重、难点]
新知初探思维启动
一、蛋白质分离提纯技术 1.将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离， 就可以得到高纯度的、甚至是__单__一__种__类___的 蛋白质。 2.包括离心技术、层析技术和电泳技术等。其 中，__电__泳__技术最为快捷灵敏、简便易行。
四、其他蛋白质的提取与分离
1.牛奶中酪蛋白的提取与检测 (1)当pH＝_4_.8_时，酪蛋白的溶解度降低，并 析出沉 淀 。 用 _酒__精___除去 酪蛋 白沉淀 中 的 _脂__肪__后，即得到纯的酪蛋白。 (2)酪蛋白中含有酪氨酸，能与__米__伦__试剂起 颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成 红色。
【答案】 C
变式训练
在蛋白质的分离提纯技术中，最为简捷灵敏
的是( )
A．离心技术
B．层析技术
C．电泳技术
D．盐析
解析：选C。常用的蛋白质分离提纯技术，
包括离心技术、层析技术和电泳技来提取蛋白质，而不能分离蛋白质。
要点二 实验中应注意的一些问题 1.由于制备凝胶的丙烯酰胺和双丙烯酰胺具 有很强的神经毒性，并且容易被皮肤吸收， 因此操作必须在通风橱内或通风处进行。 2.将电泳凝胶片放在考马斯亮蓝R250染色液中 染包30 min后,多次更换脱色液至背景清晰。 脱色后，可将凝胶浸于保存液中，长期封装 在塑料袋内使其不会降低染色强度。为保存 永久性记录，可对凝胶进行拍照，或将凝胶 干燥成胶片。
二、电泳技术及分离蛋白质的原理
1.电泳现象：作为带电粒子，蛋白质在电场 中可以向与其自身所带电荷_相__反___的电极方 向移动。 2.电泳技术分离蛋白质的原理 (1)蛋白质含有游离的氨基和羧基，是_两__性___ 电解质，在一定pH条件下带有电荷。
(2)蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷 _相__反___的电极方向移动。 (3)蛋白质所带的电荷数越多，移动得_越__快__； 电荷数相同时，分子量_越__小__，则移动越快。 三、“血清蛋白的提取和分离”活动程序 1.点样：将新制血清5 μL、质量浓度为0.4 g/mL的蔗__糖__溶__液__和质量分数为0.1%的_溴__酚__蓝_ 指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取5 μL样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。