4-甲基联苯胺法
➢试剂
1、四-甲基联苯胺混合试剂： 取1% TMB乙醇溶液5ml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液 50μl，混匀。
2、稀过氧化氢（新鲜配置） 3、瑞氏染液
➢材料
患者新鲜骨髓涂片
操 临床血液学检验 作 步 骤
1、取新鲜干燥的骨髓涂片，滴加新配置的四-甲基联苯胺混合试剂 0.5ml，1分钟。 2、再加稀过氧化氢溶液0.7ml，混匀，染色6分钟。 3、倾去染液，待干，瑞氏染液复染15~20分钟。 4、流水冲去染液，待干，镜检。
病例诊断步骤
临床症状疑似白血病 血常规检查支持白血病 骨髓象检查诊断白血病 鉴别急性白血病类型
临床血液学检验
实验作业
对病例进行诊断，写出诊断流程和依据。
思考题
如何鉴别急性白血病？
➢实验材料:
➢
患者骨髓涂片
➢实验方法:
➢
瑞氏染色
➢
显微镜检查
➢
临床步血骤液2学检过验氧化物酶染色
临床应用： 鉴别急性白血病类型
实验原理： 过氧化物酶可以使过氧化氢释放出新生态氧， 氧使无色的底物四-甲基联苯胺氧化成蓝色， 该物质又自行氧化成棕色或棕黑色化合物， 固定在酶存在的部位—胞浆中。
临床血液学检验
6×109/L
涂片中有大量原始细胞, 占52%。 PLT ：75×109/L
临床血白液学血检病验的诊断鉴别诊断的步骤
结合临床症状,怀疑 患者是白血病
血常规、血象检查
骨髓象检查
细胞免疫检查 骨髓活检
细胞化学 染色体检查 染色
步骤1
临床血液学检验
骨髓象检查
实骨
验 小
髓
结象
临床血液学检验
骨髓增生极度活跃，同一类原始细胞占
90%以上，核染色质细致，有核仁。有些 细胞胞体略小。其它系列受抑制，数量均 减少。
临床血液学检验 实验结果
过氧化物酶阳性： 颗粒稍粗，分布较密。
急性粒细胞性白血病 原始细胞>90%
急性粒细胞性白血 病未分化型(M1)
临床血液学检验
临床血液学检验
实验九、白血病的实验室诊断 （设计性实验）
北华大学医学院 血液检验教研室
临床血液学检验
实验目的
1、通过实验初步了解临床白血病的诊断和 鉴别诊断的步骤和流程。
2、熟悉血细胞化学染色的方法、结果判断 和临床意义。
临床血液学检验 实验安排
给出病例，病例讨论 学生根据病例，设计实验室诊断流程
临床血液学检验
注意事项
➢1、血片或骨髓片必须是新鲜的，否则，过 氧化物酶活性会下降。
➢2、过氧化氢必须新鲜配置，浓度适当。
➢3、四-甲基联苯胺有毒，避免接触皮肤。
临床血液学检验
结果判断
1、阴性：胞浆中无棕黑色颗粒（如：急淋） 2、弱阳性：胞浆中细小的兰色颗粒，分布稀疏（如：急单）
阳性：胞浆中棕黑色颗粒稍粗，分布较密。 （如：急粒） 强阳性：胞浆中棕黑色颗粒粗大，密布整个胞浆。（如：急粒）
教师指导学生实验的选择、操作 学生根据实验结果，诊断疾病 教师总结实验
临床血液学检验
出血点
病例
某患者，男，27岁，近一个月经常小腿痛，三天前 突然高热39.5℃，服药无效后前来就医，贫血貌，查体： 口腔粘膜有溃疡，颈部有出血点，胸骨压痛，淋巴结肿大。
白血病典型的临床特征： 发热、贫血、出血、组织浸润