《生物化学》实验指导实验室规则一、实验目的生物化学是医学教育中的一门实践性较强的基础学科。

实验教学是过程的重要组成部分，是理论教学的延伸和补充。

实验目的是：1、初步学会生物化学实验的基本操作技能及实验研究的基本方法。

2、熟悉生物化学实验原理，了解一些临床生化检验项目。

3、培养严肃认真的工作方法、实事求是的科学态度、团结协作的工作作风和观察分析、思考、独立解决问题的能力。

二、实验基本要求实验教学包括实验前准备、实验操作、整理实验结果、书写实验报告等环节，为了提高实验效果，实现实验目的，要求学生必须做到以下几点。

（一）实验前1、仔细阅读实验指导，了解实验目的和要求，充分理解实验原理，熟悉实验步骤、操作程序和注意事项。

2、预测实验各个步骤可能得到的结果，对预期实验结果能做出合理的解释。

3、注意和估计实验中可能发生的误差，并制定防止误差的措施。

（二）实验时1、保持实验室肃静，不能进行与实验无关的活动。

2、在教师或实验技术人员的指导下，熟悉仪器的构造、性能及操作规程。

3、实验器材摆放整齐，有条不紊、装置正确。

4、按照实验步骤，严肃认真的循序操作，不能随意更动。

5、爱护公物，注意节省实验器材和药品。

注意安全，严防触电、火灾、酸碱灼伤及中毒事故的发生。

6、仔细、耐心地观察实验田中出现的现象，随时客观的记录实验结果，以免发生错误或遗漏。

实验条件应始终保持一致，如有变动,应加文字说明。

（三）实验后1、整理实验结果，书写实验报告，按时交给指导教师评阅。

2、整理实验仪器和清洗玻璃仪器，关闭仪器、设备和电源。

清点实验器材，办理借还手续。

3、做好实验室清洁卫生工作，关闭水、气阀门，切断电源，关闭门窗，确保安全。

实验一生化实验基本操作一、实验目的通过基本操作训练，学会熟练进行进行玻璃仪器洗涤；吸量管使用；溶液的混合；离心机使用；７２１型分光光度仪使用。

二、实验用品烧杯、试管；吸量管、移液管；旋涡混合（振荡）器、玻璃棒；离心机使用；７２１型分光光度仪三、实验内容及步骤（一）玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。

洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。

（二）吸量管的使用1．刻度吸量管的正确使用方法用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。

吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低点与吸量管的刻度线相齐为止。

然后将吸量管插到需加试剂的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。

液体流完后再等15秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下吸量管移去）。

2．定量吸液器的使用方法(微量加样器)：1)选择适当的吸液器：吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要轻轻旋紧一下，以保证结合严密。

2)持法：右手四指（除大拇指外）并拢握住吸液器外壳（使外壳突起部分搭在食指近端），大拇指轻轻放在吸液器的按钮上。

3)取样(吸液)：用大拇指按下按钮到第一停止点，以排出一定容量的空气，随后把吸嘴尖浸入取样液内，徐徐松开大拇指，让按钮慢慢自行复原，取样即告完成。

4)排液：将吸液器的吸嘴尖置于加样容器壁上，用大拇指慢慢地将按钮按下到第一停止点，停留1秒钟（粘性较高的溶液停留时间应适当延长）。

然后再把按钮按到第二停止点上，让吸嘴沿管壁向上滑动。

当吸嘴尖与容器壁或溶液离开时，方可释放按钮，使其恢复到初始位置。

5)吸液器用后应及时取下吸嘴。

将吸嘴用自来水冲洗后浸入盛水的容器内（以防干涸），待实验结束后集中仔细清洗。

（三）溶液混匀1．混匀的方法1)使盛器作离心运动。

2)左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。

3)利用旋涡混合（振荡）器混匀。

4)不得已时可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。

（四）离心机使用1．TGL-20M台式离心机使用方法操作程序：1）把离心机放置于平面桌或平面台上，四只橡胶机脚应坚实接触平面，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平稳。

2）打开门盖，将离心管放入转子体内，离心管必须成偶数对称放入（离心管试液应称量加入），注意把转子体上螺钉旋紧，并重新检查试管是否对称放入、螺钉是否旋紧。

3）关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。

4）插上电源插座，按下电源开关。

5）设置转子号、转速、温度、时间：（五）分光光度仪使用721型1）721分光光度计使用前应预热20分钟，做样之前应对比色皿成套性进行校正，减小测量误差。

2）波长选择置于所要分析物相对应的波长值，3）打开比色皿盖进行调零调整面板0旋钮进行零点调整。

4）将空白放入比色皿盒后盖上比色皿盖，调整100旋钮进行100%调整。

5）然后逐一拉出样品进行比色分析。

四、实验报告与内容（略）五、注意事项（一）使用刻度吸量管的注意事项：1)选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积应等于或略大于所需容积（ml数）。

2)仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还是从下而上？3)拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读数。

4)吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试剂液面深部(以免吸液过程中因液面降低而吸入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。

5)按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。

6)吸取粘滞性大的液体(如血液、血浆、血清等)时，除选用合适的吸管(奥氏管)外，应注意拭净管尖附着的液体，尽量减慢放液速度(用食指压力控制)，待液体流尽后吹出管尖残留的最后一滴液体。

使用的吸量管应干净、干燥无水。

如急用而又有水时，可用少量欲取试剂冲洗3次，以免试剂被稀释。

（二）溶液混匀注意事项：1)防止盛器内的液体溅出或被污染。

2)严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。

六、思考题1、吸取某标准液0.75ml，应选用ml的吸管移取。

2、去油污能力最强的洗液是。

3、配制0.4M NaOH溶液1000ml，需NaOH 克。

4、配制0.5M HCL 400ml，需1M HCL溶液毫升。

一、实验目的通过接触尿蛋白定性实验，初步学会判断和了解肾脏功能是否出现问题及问题的严重性二、实验原理在含有蛋白质的尿液中另磺柳酸时，可产生白色沉淀。

是磺柳酸的酸离子可与蛋白质碱性基团结合，生成不溶性蛋白盐深沉。

三、实验用品与试剂配制尿杯、试管、滴管、20%磺柳酸溶液四、实验内容及步骤1、采集尿液标本：用尿杯采集自己的尿液标本备用。

2、取试管一支，加入清晰的尿液24滴，然后加入20%磺柳酸溶液2滴，轻轻摇匀，一分钟后观察结果。

3、结果记录和判断：尿蛋白定性实验是尿常规检查中必做的一项实验，是诊断肾脏疾病和病变的重要常规指标之一。

尿蛋白定性试验常通过半定量方式或加号方式检测尿液中排出的蛋白质的多少，用于判断和了解肾脏功能是否出现问题及问题的严重性，其结果可用阴性‘—’、微量‘±’、1--4个加号‘+’‘++’‘+++’‘++++’表示，也可用数值表示，加号越多或数值越高则尿蛋白越多。

五、实验报告与内容此次实验结果为六、注意事项收集中段尿七、思考题试讨论尿蛋白定性实验临床意义一、实验目的学会验证蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的实验操作。

二、实验原理蛋白质分子中的氨基酸是以肽键连接的，因此蛋白质具有缩二脲反应。

由于蛋白质分子中含有自由氨基，可与茚三酮试剂作用生成紫蓝色化合物，称茚三酮反应。

以上呈色反应可用于检验蛋白质。

在蛋白质溶液中加入中性盐时，蛋白质即沉淀，这种过程称为盐析。

盐析包括：（1）大量电解质破坏蛋白质的水化层而出现沉淀；（2）电解质中和了蛋白质分子的电荷而沉淀。

中性盐能否沉淀各种蛋白质决定于中性盐的浓度、蛋白质的种类、溶液的pH、以及蛋白质胶体颗粒的大小。

颗粒大的比颗粒小的容易析出，如球蛋白多在半饱和(NH4)2SO4溶液中析出，而清蛋白则常在饱和(NH4)2SO4溶液中析出。

极性较大的有机溶剂，对水的亲和力较大，可破坏蛋白质的水化层使其沉淀；当溶液的pH值大于蛋白质的等电点时，蛋白质带负电荷，可与重金属离子结合成蛋白盐沉淀；在溶液的pH值小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，可与酸根离子结合成蛋白盐沉淀。

蛋白质解离成两性离子时，溶液的pH值称该蛋白质的等电点。

酪蛋白溶液在等电点时很不稳定，可以发生沉淀。

所以，可以根据相对浊度来测定酪蛋白的等电点的近似值。

三、实验用品与试剂配制1、蒸馏水2、10% 鸡蛋白溶液 (v / v )3、0.2 %茚三酮乙醇液4、固体(NH4)2SO45、0.5% NaOH溶液6、0.5% 硫酸锌溶液7、10% 三氯乙酸溶液8、0.01 mol/L 醋酸9、0.1 mol/L醋酸 10、1.0mol/L醋酸11、饱和(NH4)2SO4溶液：称取377 g硫酸铵溶于20℃500ml的蒸馏水中。

硫酸铵在20℃水中的溶解度为754g/L水。

配制时需称取稍过量的硫酸铵使溶液中有少量固体存在，同时可加热助溶。

12、0.5%酪蛋白醋酸钠溶液：称取纯酪蛋白0.25g，置于50ml容量瓶内，准确地加蒸馏水20 ml及1mol/L NaOH 5ml，摇匀，使酪蛋白溶解，然后准确地加1mol/L醋酸液5ml，最后用蒸馏水稀释至刻度。

13、滴管、试管和试管架、记号笔。

四、实验内容及步骤（一）茚三酮反应取小试管1支，加10 %鸡蛋白溶液4滴，蒸馏水10滴和0.2 %茚三酮乙醇液6滴，混匀，在沸水浴中加热5～10分钟，待冷却后观察溶液的颜色变化。

（二）沉淀反应⒈盐析：取10%鸡蛋白溶液4ml于小试管中，再加入4ml 饱和(NH4)2SO4溶液，混匀，静置20分钟后，则球蛋白全部析出。

离心（2000转/分钟）5分钟，取上清液1ml加固体(NH4)2SO4约0.5g 使之饱和，边加边振摇至溶液出现浑浊，再向浑浊液（应不含硫酸铵结晶颗粒）加1.5～2.0ml蒸馏水，观察结果。

⒉重金属盐沉淀蛋白质：取试管1支，加入10%鸡蛋白溶液1ml，及0.5%NaOH溶液1滴混匀，再加入0.5%硫酸锌溶液6滴，观察结果。

⒊三氯乙酸沉淀蛋白质：取试管1支，加入10%鸡蛋白溶液1ml，然后再加入10%三氯乙酸溶液3～5滴，观察沉淀的生成。

（三）蛋白质等电点的测定：⒈取5个大试管，编号，按下表准确加入试剂，混匀。

⒉各试管加入酪蛋白醋酸钠溶液时，应随加随摇（切勿在各管加完后才摇），观察各管浊度。

静置10～30分钟后，比较各管浊度，用（＋）多少表示其浑浊程度。

沉淀最多而上清液最透明的试管的pH值，即为酪蛋白的等电点。

为什么？五、实验报告与内容（一）茚三酮反应结果（二）沉淀反应结果（三）蛋白质等电点的测定沉淀最多而上清液最透明的试管的pH值= ，即为酪蛋白的等电点。