2015年度本科生毕业论文（设计）桉树叶中原花青素的提取英文题目Extraction of anthocyanins fromleaves of Eucalyptus院（系）：资源环境学院专业：化学年级： 2012级学生姓名：王兴刊学号： 120640135导师及职称：张星和（助教）2015年 06月毕业论文（设计）原创性声明本人所呈交的毕业论文（设计）是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。
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作者签名：日期：毕业论文（设计）授权使用说明本论文（设计）作者完全了解保山学院有关保留、使用毕业论文（设计）的规定，学校有权保留论文（设计）并向相关部门送交论文（设计）的电子版和纸质版。
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作者签名：指导教师签名：日期：日期：毕业论文（设计）答辩委员会(答辩小组)成员名单摘要酶解法提取桉树叶中原花青素的工艺。
［方法］采用酶解法提取桉树叶中原花青素，在单因素试验的基础上，采用L16(45)正交试验设计，研究酶的浓度酶解温度酶解时间和料液比对桉树叶原花青素得率的影响。
［结果］在桉树叶原花青素得率的各影响因素中，影响程度依次为:料液比＞酶解浓度＞酶解时间＞酶解温度。
提取桉树叶原花青素的最佳工艺条件为:以0.5纤维素酶为提取溶剂，采用料液比为1∶50在50℃和酶解90min条件下原花青素得率为1.6722mg/g。
［结论］研究可为提高桉树利用率和工业化生产高附加值的原花青素提供数据。
关键词酶解法;桉树叶;原花青素;提取.ABSTRACTEnzymatic extraction process proanthocyandins eucalyptus leaves. [Method] The enzymatic extraction proanthocyandins eucalyptus leaves, on the basis of single factor test, using L16 (45) orthogonal design study of the concentration of enzyme hydrolysis time and hydrolysis temperature solid-liquid ratio of eucalyptus leaves proanthocyanidins yield Impact. [Result] various factors eucalyptus leaves procyanidins yield, the degree of impact as follows: solid-liquid ratio> enzyme concentration> reaction time> reaction temperature. The optimum conditions for extraction of eucalyptus leaves proanthocyanidins were as follows: 0.5 cellulase extraction solvent, the solid-liquid ratio of 1:50 at 50 ℃and hydrolysis 90min conditions proanthocyanidins yield 1.6722mg / g.[Conclusion] The study can provide data for improving eucalyptus utilization and industrial production of high value-added proanthocyanidins.Keywords: Enzymatic; eucalyptus leaves; proanthocyanidins; extraction.目录摘要 (4)ABSTRACT (5)1引言 (1)2 实验部分 (2)2.1 实验器材、药品 (2)2．2 方法 (2)2．2．1 原花青素最大吸收波长的选择 (2)2．2．2 原花青素含量计算。
公式如下： (2)2．2．3 单因素试验 (2)2．2．3．1 酶的浓度对原花青素得率的影响 (2)2．2．3．2 酶解温度对原花青素得率的影响 (3)2．2．3．3 酶解时间对原花青素得率的影响 (3)2．2．3．4 料液比对原花青素得率的影响 (3)2．2．4正交试验设计 (3)2.2.5原花青素含量的测定 (4)3 结果与分析 (4)3．1 原花青素紫外可见分光光度计扫描结果 (4)3．2 桉树叶原花青素提取单因素试验 (5)3．2．1 酶的浓度对原花青素得率的影响 (5)3．2．2 酶解时间对原花青素得率的影响 (5)3．2．3 酶解温度对原花青素得率的影响 (6)3．2．4 料液比对原花青素得率的影响 (6)4正交试验结果 (7)5结论 (8)参考文献 (9)致谢 (10)1引言原花青素 ( Procyanidins，PC)是植物中广泛存在的一大类天然多酚化合物的总称，它是由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成［1］现代研究表明，原花青素具有抗氧化［2］清除氧自由基［3］抗肿瘤［4］保护心脑血管和预防高血压［5］抗炎［6］抗诱变［7］等多种药理活性作用。
目前，原花青素广泛应用于保健食品药品和化妆品领域［2］。
因此该技术广泛应用于大分子生物活性物质的提取桉树叶有着很好的营养价值和特殊的保健作用［8］，桉树叶黄酮是包裹在细胞壁中，而这些细胞壁的主要成分是纤维素。
为了提高提率就必须先打破细胞壁释放出里面的物质。
所以纤维素就成了影响提取率的最大因素[9]。
为了避免有机溶剂的残留以及提高提取率，就要加入纤维素酶，破换细胞壁，让原花青素充分流出来。
据文献报道，桉树叶含有大量有效成分，这些物质具有强烈的生理活性，在食品、化工、医药、环境、能源等方面有着广泛的用途[10]。
我国的桉树资源十分丰富目前，如果从桉树叶中提取其有效成分，既综合利用了资源，加了桉树产业的附加值，又减少了环境的污染，具有一定的经济意义和价值，而有关桉树叶中原花青素提取的研究国内外报道甚少笔者通过正交试验优化桉树叶中原花青素的提取工艺条件，为提桉树叶的利用率和工业化生产高附加值的原花青素提供理论依据。
就目前利用原花青素的现状来看，只有在国外发达的国家应用比较广泛。
由于其技术水平有限和经济方面等各种因素的决定，导致原花青素的利用还比较局限。
但在发达地区原花青素已经被广泛的用与保健食品、医药及化妆品领域[6]。
在不久的将来，我国再利用原花青素的领域也将会更加深入，在法国，用葡萄仔提取的原花青素被制成了很多化妆品及用于眼睛疾病的治疗，还有淋巴功能不全及毛细管通透性疾病。
1990年日本Yanmaskosh研制了原花青素含量为1﹪的低聚体化合物，可使人体皮肤洁亮和美白其效果好于油性化妆品等其他美白系列产品[7]。
桉树叶中原花青素的提取2 实验部分2.1 实验器材、药品选材地:桉树叶，学校后山就地取材桉树叶晒干粉碎备用主要试剂: 无水乙醇、甲醇、正丁醇、盐酸、硫酸铁铵（以上化学试剂均为分析纯）。
主要仪器设备:电子天平，7230G可见分光光度计， HH-4型数显恒温水浴锅，GZX-9070MBE数显鼓风干燥箱，粉碎机。
2．2 方法2．2．1 原花青素最大吸收波长的选择准确移取1.0ml标准储备液于10mL比色管中，再加入6．0mL正丁醇－盐酸溶液( 95/5，V/V)和0．2mL,2%硫酸铁铵溶液，摇匀后，置沸水浴95℃（±5℃）加热40min，然后迅速冷却，将反应液用紫外可见分光光度计扫描，以确定最大吸收波长。
2．2．2 原花青素含量计算。
公式如下：得率=（C×V×N）/（1000W）×100% (2—1)式中，V，试样定容体积( mL) ; C，试样中原花青素浓度( mg/mL) ;N，稀释倍数;W，试样质量( g)2．2．3 单因素试验2．2．3．1 酶的浓度对原花青素得率的影响准确称取桉树叶粉末5份各1.0g分别置于圆底烧瓶中，加入相同体积70％乙醇溶液，分别加入浓度0.5% 1.0% 1.5% 2.0%的纤维素酶溶液各1.0mL，摇匀后移入60℃恒温水浴锅中，水浴50min后取出离心5min，滤液倒入量筒内，滤保山学院本科毕业论文（设计）渣再次60℃恒温回流90min，滤液倒入量筒内，取一定量两次上清液的混合液测定其吸光度值。
2．2．3．2酶解温度对原花青素得率的影响准确称取桉树叶粉末5份各1.0g分别置于圆底烧瓶中，加入相同体积70%乙醇溶液，分别加入浓度1.0％的纤维素酶溶液1.0mL，摇匀后分别移入40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒温水浴锅中，水浴50min后取出离心5min，滤液倒入量筒内，滤渣再次60℃恒温回流90min，滤液倒入量筒内，取一定量两次上清液的混合液测定其吸光度值。
2．2．3．3 酶解时间对原花青素得率的影响准确称取桉树叶粉末5份各1.0g分别置于圆底烧瓶中，加入相同体积70%乙醇溶液，分别加入浓度1.0％的纤维素酶溶液1.0mL，摇匀后移入60℃恒温水浴锅中，分别水浴30min、50min、70min、90min、110min后，取出离心5min，滤液倒入量筒内，滤渣再次60℃恒温回流90min，滤液倒入量筒内，取一定量两次上清液的混合液测定其吸光度值。
2．2．3. 4 料液比对原花青素得率的影响准确称取桉树叶粉末5份各1.0g分别置于圆底烧瓶中，各加入70%的乙醇溶液20mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL，分别加入浓度1.0％的纤维素酶溶液1.0mL，摇匀后移入60℃恒温水浴锅中，水浴50min后取出离心5min，滤液倒入量筒内，滤渣再次60℃恒温回流90min，滤液倒入量筒内，取一定量两次上清液的混合液测定其吸光度值。
2．2．4正交试验设计在单因素试验基础上，对影响桉树叶原花青素提取效果的主要因素酶的浓度、酶解温度、酶解时间和料液比进行L16(45) 试验，因素水平见表1.桉树叶中原花青素的提取表1 正交试验因素水平设计因素水平料液比酶解温度酶解时间酶解浓度(A)／g ／mL (B)／℃ (C)／S (D)／％11:40 40 50 0.5 21:50 50 70 1.0 3 1:60 60 90 1.52.2.5原花青素含量的测定准确移取1.0ml 标准储备液于10mL 比色管中，再加入6．0mL 正丁醇－盐酸溶液( 95/5，V/V) 和0．2mL,2%硫酸铁铵溶液，旋紧试管于95℃±5℃的水浴中加热40min ，立即取出放入事先准备好的冷水中冷却15min 。