直接凝集试验 间接凝集试验
直接凝集试验
概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的 参与下，直接结合，凝集成团的现象， 称直接凝集试验。
类型：按其操作方法可分为玻片法和试管 法。
1．玻片凝集试验
方法：在玻璃板或瓷 片上进行。
特点：简单、快速。 用途：定性试验，如
细菌鉴定、血型鉴定 等。
2．试管凝集试验
方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如
诊断布氏杆菌病，测 定抗体的凝集价。
结果判定 结果用“+”表示反应强度。 ++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。 +++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。 ++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。 + ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。 — ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中
交叉性 两种不同的抗原之间 含有共同的抗原决定 簇，则发生交叉反应 。
反应的二阶段性
第一阶段
第二阶段
抗原与抗体的特异性结 抗原抗体复合物出现可
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合阶段，此阶段反应快、 见反应阶段。此阶段反
仅数秒至数分钟，但不 应慢、需数分钟、数十
出现可见反应。
分钟或更久。
敏感性
抗原抗体的结合还具有高度敏感 性的特点，不仅可检测定性，还 可以定量检测微量、极微量的抗 原或抗体。
上层沉淀原在液界面应形成白 色沉淀环。 用途：主要用于抗原的定性试 验，如炭疽杆菌的Ascoli试验、 链球菌的血清型鉴定、血迹鉴 定等。
沉淀原 白色沉淀环 沉淀素
琼脂凝胶扩散试验
原理
1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗 原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝 胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成 沉淀线。
酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使 复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。
振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞， 加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体 复合物解离。
杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物 存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。
用已知测未知
所有的血清学试验都 是用已知抗原测定未 知抗体，或用已知抗 体测定未知抗原。
影响血清学试验的因素
电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10%
温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体
分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速 抗原抗体结合和反应现象的出现 。
最适比例与带现象 抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体
除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二 价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗 原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以 继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联 结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例 最适合，出现反应最快，反应产物愈多。
心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物
（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可 疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集 价判为可疑。 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。

血清学试验的类型
凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术
凝集试验的概念
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附 在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的 可溶性抗原，与相应抗体结合后，在 有适量电解质存在下，经过一定时间， 复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集 团块，称为凝集试验。
凝集试验的类型
间接凝集试验
概念：
将可溶性抗原或抗体与载 体连接后，再与相应的抗 体或抗原作用，所出现的 特异性凝集反应为间接凝 集试验。
类型：
间接血凝试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验
间接血凝试验原理
红细胞
抗原
致敏红细胞
被检抗体
致敏红细胞
红细胞凝集
凝集强度判定 ＋ （100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底） ± （50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量
血清学诊断
血清学试验的概念
由于抗体主要存在于 血清中，所以将体外 发生的抗原抗体结合 反应称为血清学反应 或血清学试验。
血清学试验的特点
特异性和交叉性 敏感性 可逆性
反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知

特异性和交叉性
特异性 抗原只能与相应抗 体结合，而不能与 其他抗体相结合。
琼脂凝胶扩散试验类型
如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达 到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合， 不出现可见反应，谓之带现象。
前
带
后
带
可逆性
抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种 结 合 是 可 逆 的 ， 结 合 条 件 为 0℃ ～ 40℃ 、 pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下， 或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重 新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不 改变。
以能使100%红细胞不发生凝集的血清最大稀释倍数为该血清的HI 滴度，以2的指数表示。
沉淀试验的概念
可溶性抗原与相应 的抗体结合，在适 量电解质存在下， 经过一定时间，形 成肉眼可见的白色 沉淀，称为沉淀试 验。
沉淀试验的类型
环状沉淀试验 琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳
环状沉淀试验
方法：在小口径试管中进行。 原理：试管内，下层沉淀素与
红细胞沉淀 － 红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。
能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞 凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27， 即将病毒原液作27倍稀释，其中含一个血凝单位的病毒。
由于病毒血凝抑制试验中需要的病毒液应含4个血凝单位，因此， 需要对原病毒液进行25倍稀释。