海南大学《专业技能实习》实习报告题目：市场地瓜叶品质分析成员：黎陛成苏蔚晓欧先臻胡玉麟何玉龙朱乘明朱云山陈风美齐昌国年级：2013级学院：农学院专业：农业资源与环境完成日期：2016年11月15日成员分工情况一、样品获取与处理（一）样品的获取从海南大学附近的菜市场购买了5个品种的地瓜叶，其编号依次为A、B、C、D、E，具体情况见下表。

品种总重量(g) 总价（元）A 804.45 6.0B 685.41 5.0C 823.48 6.0D 583.05 4.0E 494.05 4.0总计花费25.0元。

采集过程如下图：（二）样品的处理用干净的毛巾擦净地瓜叶表面的灰尘，剪掉叶柄。

一半用塑料袋装好放在冰箱里保存，另外的一半装在信封里，称重（不含信封重量）后，在90℃杀青30 min，70℃烘干4天。

取出烘干样品后进行称重（不含信封重量），计算含水量。

数据处理见下表品种编号鲜重（g）烘干后样重（g）含水量（%）（m鲜-m烘）/ m鲜A 268.56 18.12 93.25B 174.47 12.83 92.65C 290.49 23.41 91.94D 231.33 15.09 93.48E 164.38 13.14 92.01二、硝酸根离子含量的测定（一）实验原理浓酸条件下N03-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。

其在碱性（pH>12.0）条件下于410 nm处有最大吸收,并且在一定范围内与N03-含量呈线性关系。

生成的黄色化合物,颜色可稳定至少分钟不褪色。

此外一,场十基本上无影响。

反应方程式如下:(二)材料、仪器设备及试剂1. 材料地瓜叶的新鲜叶片2. 仪器准备分光亮度计，百分之一天平，万分之一天平，20 mL试管，50 mL容量瓶，小漏斗，玻璃棒，锅，塑料薄膜，定量滤纸。

3. 试剂（1）500μg/mL硝态氮标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221 g溶于去离子水中，定容至200 mL。

（2）5%水杨酸-浓H2SO4溶液：称取水杨酸5 g，溶于浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，最多保存一周，最好是现用现配。

（3）8% 氢氧化钠溶液：称取20 g氢氧化钠溶于250 mL去离子水中。

（三）实验步骤1. 标准曲线的制作分别吸取500μg/mL硝态氮标准溶液1mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL、12 mL，放入50 mL容量瓶中，用去离子水定容，使之成10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL硝态氮的系列标准溶液。

吸取上述系列标准溶液0.1 mL，分别放入20 mL试管中，以0.1 mL去离子水代替标准溶液作空白。

再分别加入0.4 mL 5%水杨酸-浓H2SO4溶液，摇匀，在室温下放置20 min 后，再加人8%氢氧化钠溶液9.5 mL，，摇匀冷却至室温。

显色液的总体积为10 mL。

以空白作为参比，在410 nm波长下测定吸亮度。

以硝态氮浓度为横坐标（x），吸亮度为纵坐标(y) ，绘制标准曲线并计算出回归方程。

2. 样品中硝酸盐的测定（1）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀，精确称取2.0 g，放人20 mL试管，加人10 mL 去离子水，用塑料薄膜封口，置入沸水浴中30 min后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到50 mL容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

（2）样品液的测定：吸取样品液0.1 mL，放入20 mL试管中，以0. 1 mL去离子水代替样品液作空白。

再加入0.4 mL 5%水杨酸-浓H2SO4溶液，摇匀后在室温下放置20 min 。

再慢慢加人8% 氢氧化钠溶液9.5 mL，摇匀。

冷却至室温后，以空白作参比，在410 nm波长下测其吸亮度。

用回归方程计算出硝态氮浓度，计算样品中硝态氮含量。

（四）结果计算单位鲜重样品中硝态氮含量=x×V1W×V2(μg/mL)式中：x为回归方程计算出的硝态氮浓度，μg/mL；V1为样品定容体积，mL；W为样品重量，g；V2为测定取用的样品提取液体积，mL。

（五）数据处理1. 标准曲线的制作C 0.0 0.2 0.4 0.8 1.6 2.0 2.4A 0.063 0.067 0.07 0.078 0.094 0.102 0.112 以空白参比，进行调零校正，得到：C 0.0 0.2 0.4 0.8 1.6 2.0 2.42. 样品液的测定结果A A校正（A-0.075）C(μg/mL)（(A校正+0.0006)/0.0201）含量(μg/g)（(C*50)/(2*0.1)）空白1 0.075空白2 0.075A-1 0.11 0.032 1.6219 405.4726A-2 0.114 0.039 1.9701 492.5373A-3 0.113 0.038 1.9204 480.0995B-1 0.089 0.014 0.7264 181.5920B-2 0.088 0.013 0.6766 169.1542B-3 0.087 0.012 0.6269 156.7164C-1 0.091 0.016 0.8259 206.4677C-2 0.093 0.018 0.9254 231.3433C-3 0.091 0.016 0.8259 206.4677D-1 0.093 0.018 0.9254 231.3433D-2 0.095 0.020 1.0249 256.2189D-3 0.096 0.021 1.0746 268.6567E-1 0.125 0.050 2.5174 629.3532E-2 0.128 0.053 2.6667 666.6667E-3 0.126 0.051 2.5672 641.7910注：在本实验中，样品定容体积V1=50 mL，样品重量W=2 g，测定取用的样品提取液体积V2=0.1 mL。

3. 样品液测定结果的方差分析描述硝态氮含量(μg/g)N 均值标准差标准误均值的95% 置信区间极小值极大值下限上限品种A 3 459.369800 47.0888080 27.1867360 342.394716 576.344884 405.4726 492.5373 品种B 3 169.154200 12.4378000 7.1809672 138.256992 200.051408 156.7164 181.5920 品种C 3 214.759567 14.3619344 8.2918667 179.082544 250.436589 206.4677 231.3433 品种D 3 252.072967 18.9990533 10.9691086 204.876702 299.269232 231.3433 268.6567 品种E 3 645.936967 18.9991079 10.9691400 598.740566 693.133367 629.3532 666.6667 总数15 348.258700 186.4960720 48.1530787 244.980618 451.536782 156.7164 666.6667单因素方差分析硝态氮含量(μg/g)平方和df 均方 F 显着性组间480330.488 4 120082.622 181.930 .000组内6600.500 10 660.050总数486930.988 14在给定显着性水平α为0.05的前提下，由于其显着性为0.000 < 0.05，故认为不同品种的硝态氮含量存在显着差异。

三、可溶性糖含量的测定（一）实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm ，故在此波长下进行比色。

（二）实验材料、试剂与仪器设备1. 实验材料地瓜叶的新鲜叶片2. 试剂（1）1% 蔗糖标准溶液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000 g。

加少量水溶解，转入100 mL 容量瓶中，加入0.5 mL 浓硫酸，用去离子水定容至刻度。

（2）100μg/mL蔗糖标准溶液：精确吸收1% 煎糖标准液1 mL 加入100 mL 容量瓶中，加去离子水定容。

（3）80% 浓硫酸：将98% 浓硫酸稀释，把163.266 mL浓硫酸缓缓加入到36.734 mL 蒸馏水中，总体积为200 mL。

（4）蒽酮试剂：称取0.2 g 蒽酮，溶于200 mL 80% 浓硫酸中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。

3. 仪器准备分光亮度计，百分之一天平，万分之一天平，20 mL试管，50 mL容量瓶，小漏斗，玻璃棒，锅，塑料薄膜，定量滤纸。

（三）实验步骤1. 样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5～1.0 g，放入大试管中，加入15 mL 去离子水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入50 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。

2. 标准曲线制作：吸取5mL的100 μg/mL蔗糖标准溶液到50 mL容量瓶，用去离子水定容。

取6 支大试管，从0 ～ 5 分别编号，按表24-1 加入各试剂。

表24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂试管0 试管1试管2试管3 试管4 试管5 10 μg/mL 蔗糖溶液（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1蒸馏水（mL） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蒽酮试剂（mL） 5 5 5 5 5 5 蔗糖含量（μg）0 1 2 3 4 5将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定吸亮度，以吸亮度为纵坐标，含蔗糖量（μg）为横坐标绘制标准曲线。