答:盐溶:蛋白质在第离子强度的介质中表现为溶解,盐析:蛋白质在高离子强度介质中表现为盐析。
常用盐为硫酸铵,原因:高盐吸水,夺取水相
*常用于蛋白质沉淀的方法有哪些?
答:盐析法、PEG沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、热处理沉淀法
*色谱法纯化蛋白质常用哪些类型?分别根据什么原理进行分离?
答:排阻色谱、离子交换色谱、亲和色谱、疏水色谱、经典的吸附色谱等。
原理上述有写
*什么是密度梯度离心?
答:密度梯度离心:一种在连续或者不连续的密度梯度介质中,将物质进行离心的方法。
(装载密度梯度介质,梯度介质有足够大的溶解度,常用介质:蔗糖密度梯度系统,制备:梯度混合器,层层铺垫,介质的最大密度比沉降样品的最小密度小。
,适用于大小有别而密度相似的样品)
*什么是透析?主要用途是什么?
答:透析:样品装入由半透膜制成的透析袋,透析膜允许容积小分子的溶质通过,而大分子则载留在袋内。
用途:透析的主要用途是从生物大分子样品中除去盐类或其它小分子物质。
透析法也可以用来除去与生物大分子结合较弱的小分子或离子,如金属离子及酶的辅助因子NAD,FAD等
*蛋白质的定量方法有哪些?
答:1光谱法(紫外吸收光谱法)2化学法(凯氏定氮法测有机物含氮量经典方法,双缩脲法,福林-酚法,染料结合方法)
*什么是凯氏定氮法?试分析出现奶粉事件的原因以及改进办法?
答:凯氏定氮法:测定化合物或者混合物中的总氮量的一种方法(方法:
消化 用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵;(耗时),蒸馏 用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发;吸收 用酸性溶液(硼酸)吸收气态氨(使[H+] ),滴定 用已标定的无机酸滴(使[H+] 恢复),计算总氮量)。
奶粉事件的原因:有毒奶粉中主要是过多添加了三聚氰胺,而奶粉中常常需要测定食品的蛋白质含量,由于直接测量蛋白质技术上比较复杂,所以常用凯氏定氮法的方法,通过测定氮原子的含量来间接推算食品中蛋白质的含量。
由于三聚氰胺与蛋白质相比含有更多的氮原子,所以在一些事件中被一些造假者利用,添加在食品中以造成食品蛋白质含量较高的假象。
改进方法:三聚氰胺HPLC-UV检测方法:三聚氰胺是强极性化合物,在传统的反相C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱,可以得到良好的分离效果
*蛋白质的纯度如何鉴定?
答:聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),等电聚焦,毛细管电泳,HPLC
*蛋白质的分子量测定有哪些方法?分别有什么特点?
答:SDS-PAGE,凝胶过滤,毛细管电泳,质谱法
特点:sds-page:误差小,重现性好,紫外可测,一次实验可以获得多种定量数据。
凝胶过滤:可测定水溶性高聚物的平均分子量
毛细管电泳:高速,高效,高分辨率。