光度计的读数标尺上透射比T的刻度是均匀的， 故透射比的读数误差∆T(绝对误差)与T本身的大小 无关，对于一台给定的仪器它基本上是常数，一般 在0.002-0.01之间，仅与仪器自身的精度有关。
但光度分析的目的是通过T测得溶液的浓度c，由 读数误差∆T引起的被测组分浓度测量的相对误差用 ∆c/c表示(其中∆c为浓度的绝对误差)。
显色剂：能与被测组分反应使之生成有色物质的试 剂称为显色剂。
2、显色反应分类： 可分为氧化还原反应和络合反应两类。
3、显色剂分类： 可分为无机显色剂和有机显色剂两类。
选择显色反应或显色剂的注意事项： 1、选择性好。 2、灵敏度要高。 3、对比度要大。指有色化合物与显色剂两者的 最大吸收波长的差别要大，一般要求相差60nm以 上。 4、有色化合物要稳定，组成要恒定。 5、显色反应的条件要易于控制。
以 mol·L-1 为 单 位 时 ， K 用 ε表示，称为摩尔吸收 系数，其单位为L·mol-1·cm-1。此时朗伯-比尔定 律表示为
A= εbc
(3)桑德尔灵敏度S 定义：当光度仪器的检测极限为A=0.001时
（即仪器所能检测出的最小吸光度值），单位 截面积光程内所能检出的吸光物质的最低质量，
这种方法简便、快速，对于解离度小的络合物， 可以得到满意的结果。
2、等摩尔连续变化法
此法的做法是保持CM和CR的浓 度保持不变，即CM + CR = 常数， 连续改变CM和CR的比值，在选定 的仪器条件和波长下测定溶液的
吸光度A。
以A对CM/CR +CM作图。
等摩尔连续变化法测定络合物组成
基于上述特点，吸光光度法被称作现代分析化学的 “常规武器”。
§8-2光吸收的基本定律
一、物质对光的选择性吸收 1、物质对光产生选择性吸 收的原因 2、物质的颜色与光吸收的 关系
吸收曲线的形状和最大吸收波长的位置取决于 物质的分子结构，不同的物质因其分子结构不同而 具有各自特征的吸收曲线，据此也可以进行物质的 定性分析。
第八章 可见分光光度法
§8-1概述
吸光光度法：是基于物质对光的选择性吸收而 建立起来的一类分析方法。又称分光光度法，简称 光度法。包括比色法、可见及紫外分光光度法和红 外吸收光谱法等。
本章主要讨论：溶液的可见分光光度法。其测 定对象以金属离子为主。
可见分光光度法: 是根据物质对可见光区某一波长光的吸收程度
曲线的转折点所对应的横坐标值即为配合物的 配位比。即CM:CR=m:n
随着络合剂量逐渐增加，生 成的络合物便不断增多。当络 合剂增加到一定浓度时，吸光 度不再增大，如右图所示。
图中曲线转折点不敏锐，是由于络合物解离造 成的。运用外推法得一交点，从交点向横坐标作 垂线，对应的[R]/[M]比值就是络合物的络合比。
As=KbCs
Ax=KbCx 因 Cx ＞ Cs , 两式相减,得:
Ax-As=Kb(Cx-Cs)=Kb△C △A=Kb△C 即两溶液吸光度之差与浓度之差成正比。用 △A对△C作图，可得一条工作曲线。这就是 差示光度法的工作原理。
三、酸碱离解常数的测定
如果一种有机化合的酸性官 能团或碱性官能团是发色团的 一部分，则该物质的吸收光谱 随溶液的pH值而改变。且可从 不同pH值时所获得的吸光度测 定该物质的高解常数。
其单位为 gc。m2
S与ε的关系：
S=M/ε
例题：用邻二氮菲分光光度法测铁。已知溶液中 Fe2+的浓度为500 ug·L-1，比色皿厚度为2cm，在 508nm处，测得吸光度A=0.190。求吸收系数a，摩 尔吸收系数ε和桑德尔灵敏度S。
三、偏离朗伯-比尔定律的因素
在实际分析中，需作标 准曲线，据A=εbc应得一直 线。但情况可能如右图所 示。
对于同一物质，浓度 不同，其吸收曲线的形状 和最大吸收波长的位置不 变，只是在同一波长下吸 光度随着浓度的增大而增 大，据此可以进行物质的 定量分析。
显然，在最大吸收 波长处测量吸光度的灵 敏度最高，因此吸收曲 线是吸光光度法选择测 量波长的依据。
如果没有其它干扰， 一般都是选择最大吸收 波长为测量波长。
三、光吸收的基本定律（朗伯-比尔定律） 1、朗伯-比尔定律的由来
1729年和1760年；布格和朗伯： 阐明了物质对光的吸收程度与吸收层厚度之间的 关系。
Ak1b
1852年；比尔： 阐明了物质对光的吸收程度与溶液浓度之间的关 系。
Ak2c
由比尔将二者结合起来，就得到布格-朗伯-比尔 定律，一般叫做朗伯-比尔定律。
2、非平行入射光引起的偏离
朗伯-比尔定律要求采用平行光束垂直入射。 若入射光束为非平行光，就不能保证光束全部垂 直通过吸收池，可能导致光束的平均光程大于吸 收池厚度，实际测得的吸光度将大于理论值，从 而产生正偏离。
3、介质不均匀引起的偏离（入射光被散射）
朗伯-比尔定律要求吸光物质的溶液是均匀非 散射的。若溶液不均匀，如产生胶体或发生浑浊， 当入射光通过该溶液时，除了一部分被吸收外， 还有一部分就会因散射而损失，使透射比减小， 实测的吸光度偏高。此时该吸光物质的浓度越大， 对光的散射现象越严重，实测吸光度值偏高得越 多，从而使标准曲线的上部偏离直线向吸光度轴 弯曲，即对朗伯-比尔定律产生正偏离。
§8-4 吸光光度法分析条件的选择
在光度分析中，一般需先选择适当的试剂与试样中 的待测组分反应使之生成有色化合物，然后再进行测定。
因此，分析条件的选择包括反应条件和测量条件的 选择。
一、显色反应及其条件的选择 （一）显色反应和显色剂 1、概念：
显色反应：将被测组分转变成有色化合物的反应称 为显色反应。 M + R = MR
二、化学因素 1、平衡效应 2、酸效应 3、溶剂效应

§8-3 可见分光光度计
分光光度计的种类和型号虽然众多，但基本都由以 下五部分组成：
一、光源：6-12V的低压钨丝灯；400-2500nm 二、单色器(分光系统):棱镜或光栅 三、吸收池：规格有：0.5cm,1cm,2cm,3cm四种 四、检测系统：光电转换；光电倍增管 五、显示系统：显示信号；吸光度或透光度
来确定含量的分析方法。 与化学分析法相比，主要有以下一些特点：
(1)灵敏度高。常用于含量在1％一10-3％的微量组分的 测定，甚至可测定低至10-4％一10-5％的痕量组分。 (2)仪器设备简单，操作简便、快速。 (3)准确度较高。一般吸光光度法的相对误差为2％一5 ％;若使用精密仪器，误差可降至1％一2％，完全能够 满足微量组分的测定要求。 (4)应用广泛。该法不仅可以测定绝大多数无机离子， 也能测定许多有机物；不仅用于定量分析，也可用于 某些有机物的定性分析，还可用于某些物理化学常数 及络合物组成的测定。
作图法测定离解常数
四、络合物组成的测定 1、摩尔比法（饱和法）
设配位反应为 mM+nR=MmRn
此法是固定一种组分(通常 是金属离子M)的浓度，改变 络合剂(R)的浓度，得到一系 列[R]/[M]比值不同的溶液， 并配制相应的试剂空白作参比液，分别测定其吸 光度。以吸光度A对[R]/[M]作图。
（二）测量条件的选择 1、测量波长的选择 2、吸光度范围的控制 0.150-0.800 3、参比溶液的选择
§8-5 吸光光度法的应用
一、多组分的同时测定 依据1、吸光度具有加合性；
2、K= ε(λ)
即总吸光度为各个组分吸光 度的总和,如右图所示。
在每一组分的最大吸收波长下测量总吸光度时， 它们有下列的关系：
两个方程6个未知数， 其中四个摩尔吸光系数可 以从M和N的标准溶液获 得。
二、差示分光光度法
分光光度法主要用于测定试样中的微量组分。当 用用于测定高合量组分时，会产生很大误差。利用 差示分光光度法，就可克服这一缺点。
差示光度法:是用一个比试液浓度稍低的标准溶 液(Cs)作参比溶液与试样溶液(Cx)进行比较。根据 朗伯-比尔定律，得：
原因较多：有来自仪器 方面的；有来自溶液方面 的；还有其它方面的，等 等。
其主要原因是测定时的 实际情况不完全符合使朗 伯-比尔定律成立的前提条 件。
一、物理因素（主要来自仪器方面）
1、单色光不纯（非单色光）所引起的偏离 朗伯-比尔定律的重要假设条件之一是入射光
为
单色光，但实际上用各种方式从光源分离出来的 都是具有一定波长范围的光谱带，以它作为人射 光，就有可能导致对朗伯-比尔定律的偏离。
二、吸光光度法的测量误差及测量条件的选择
光度法的误差除各种化学因素外，还有因仪器精 度不够，测量不准所带来的误差。
（一)仪器测量误差 仪器测量误差是指在测量吸光度或透射比时所产 生的误差。它来源于很多方面。如光源和检测器的 不稳定性、吸收池位置的不确定性以及读数的不准 确性等。普通分光光度计主要的仪器测量误差是表 头透射比的读数误差。
AKbc
2、朗伯-比尔定律 的推导（数学表达 式）(略）
3、灵敏度的表示方法
(1)吸收系数a（吸光系数a ） 当液层厚度b以cm为单位、吸光物质的浓度c以
g·L-1为单位时，K用a表示，称为吸收系数，其单 位为L·g-1·cm-1。此时朗伯-比尔定律表示为
A=abc
(2)摩尔吸光系数ε 当液层厚度b以cm为单位、吸光物质的浓度c