DNA染色实验
1、原理与解析
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。
(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA 显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。
用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
(同时甲基绿用二苯胺或龙胆紫代替做平行)
(3)盐酸的作用
①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
注意事项
1.材料的选择
①选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；
②常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)
2.取材要点
①取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
②取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。
3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。
4.安全要点
①用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；
②烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。
5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。
主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
1.取材
①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2.水解
①解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
②保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3.冲洗涂片
①冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
②吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4.染色
①染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
②吸：吸去多余染色剂；
③盖：盖上盖玻片。
5.观察
①低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
②高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。
2%甲基绿水溶液的配制
甲基绿（methyl green）蒸馏水加至50mlc 用三氯甲烷抽提，甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一种化合物。
由于甲基化作用，甲基绿就比甲基绿后，所引进的甲基连接得并不牢固，容易从甲基绿中脱失。
另一方面，在甲基化过程中，还有一部分结晶紫并没有生成甲基绿，因此，也有人认为甲中，常有少量的甲基紫或结晶紫成份。
但是，也有人认为甲基紫乃是甲基绿的衰败产物，甲基绿在储存过程中，会不断产生甲基紫。
因此，在配制试剂时，必须先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来，才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染成绿色。
抽提方法是取2%甲基绿水溶液20ml 倾入洁净分液漏斗，加入三氯甲烷20ml 充分摇荡混合，使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。
旋动分液漏斗下部的砂塞，慢慢把如此反复更换三氯甲烷，直到三氯甲烷无紫红色为止，即可得到得纯的甲基绿溶液。
英文名称：Methyl Green 分子式：C27H35Cl4N3Zn 分子量：608.78 IUPAC 名称：4-((4-(dimethylamino)phenyl)(4-(dimethyliminio)cyclohexa-2,5-dieny lidene)methyl)-N-ethyl-N,N-dimethylbenzenaminium dichloride compound with zinc(II) chloride 甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。
溶于水，显蓝绿色。
稍溶于乙醇，不溶于戊醇。
盐酸中显红黄色，在氢氧化钠中无色。
试剂溶液在可见光区有吸收峰(λmax=633.8nm)。
与ReO4-、HgCl42-、BiI4-、AuCl4-和GaCl4-等形成离子缔合物。
用于光度法测定Hg2+、ReO4-等，定性检出铁氰化物，酸碱指示剂和细胞染色剂。
甲基绿为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA 结合呈现绿色。
又称双绿SF 双绿SF。
绿色晶体，具金黄色光泽，或淡绿色粉末。
溶于水，呈蓝绿色。
微溶于乙醇，不溶于乙醚。
由氯甲烷与甲基紫(C.I.碱性紫1)反应制得。
商品通常为锌复盐C26H33N3Cl2ZnCl2(称C.I.碱性蓝20)。
用于细菌染色(新鲜标本细胞核染色)甲基绿-盐酸混合物用于检定精子、淋球菌和肥大细胞染色。
甲基绿可用于鉴定DNA。
DNA 遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。
甲基绿—派洛宁（methyl green-pyronin）为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA 结合呈现不同颜色。
当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA 选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA 选择性结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。
甲基绿易与聚合程度高的DNA 结合呈现绿色。
而派洛宁则与聚合程度较低的RNA 结合呈现红色（但解聚的DNA 也能和派洛宁结合呈现红色）。
即RNA 对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA 对甲基绿亲和力大，被染成绿色。
使用配制方法关于吡罗红和甲基绿分装粉的使用方法试剂及配制方法（1）试剂）质量分数为0.9%的NaCl 溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。
如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按 A 液的第二种方法配制（见下文）。
（2）染色剂的配制）①染色剂 A 液的两种配制方法第一种方法：取吡罗红甲基绿粉 1 g，加入到100 mL 蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法：取甲基绿 2 g 溶于98 mL 蒸馏水中，取吡罗红G 5 g 溶于95 mL 蒸馏水中。
取 6 mL 甲基绿溶液和 2 mL 吡罗红溶液加入到16 mL 蒸馏水中，即为 A 液，放入棕色瓶中备用。
（注意：用于核酸染色的是吡罗红G，请不要错买吡罗红B。
）②染色剂 B 液的配制方法 B 液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4 g，用蒸馏水溶解至 1 000 mL 备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 备用。
取配好的乙酸钠溶液30 mL 和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH 为 4.8 的 B 液（缓冲液）。
③染色剂的配制染色剂是由 A 液、B 液混合配制而成的。
取 A 液20 mL 和 B 液80 mL 混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。
应该注意的是该试剂应现配现用。