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分子生物学实验常用缓冲液的配制方法
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)](在此,C(HAc)指醋酸的
浓度,C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5(1.8乘10的-5次方),PKa=-lgKa=4.75,将PH=5.5代入,可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我 们配制 时会使C(HAc)=0.1mol/L,或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L,则C(NaAc)=0.56mol/L称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克 量取冰醋酸体积为0.1*1000/ 17.5=5.7mL。将称好的
醋酸—醋酸钠缓冲液(PH4.5)
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.6)
取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值至4.6,再加水稀释至100ml,
即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH6.0)
取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。
17.82
5.6
11.60
8.40
2.8
3.17
16.83
5.8
12.09
7.91
3.0
4.11
15.89
6.0
12.63
7.37
3.2
4.94
15.06
6.2
13.22
6.78
3.4
5.70
14.30
6.4
13.85
6.15
3.6
6.44
13.56
6.6
14.55
5.45
3.8
7.10
12.90
6.8
(ml)
0.2mol/LNaH2PO
(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPO
(ml)
0.2mol/LNaH2PO4
(ml)
5.8
8.0
92.0
7.0
61.0
39.0
6.0
12.3
87.7
7.2
72.0
28.0
6.2
18.5
81.5
7.4
81.0
19.0
6.4
26.5
73.5
7.6
87.0
13.0
6.6
25.00
100.00
5.8
43.10
25.00
100.00
6.0
45.40
25.00
100.00
6.2
47.00
25.00
100.00
0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液:称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶
于水中,稀释至500ml。
磷酸缓冲液(0.2mol/L)
PH
0.2mol/LNa2HPO
17.2
4.4
11.4
8.6
6.4
2.0
18.0
4.6
10.3
9.7
6.6
1.4
18.6
4.8
9.2
10.8
柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸钠.2HO,分子量=294.12;0.1mol/L溶液含29.4 g/L
醋酸缓冲液(0.2mol/L,18C)
25.00
100.00
4.2
3.65
25.00
100.00
4.4
7.35
25.00
100.00
4.6
12.00
25.00
100.00
4.8
17.50
25.00
100.00
5.0
23.65
25.00
100.00
5.2
29.75
25.00
100.00
5.4
35.25
25.00
100.00
5.6
39.70
1.40
4.4
3.70
6.30
5.6
9.10
0.90
4.6
4.90
5.10
5.8
9.40
0.60
NaAC.3 HO,分子量=136.09 0.2mol/L溶液含27.22g/L
(1)醋酸盐溶液的配制:
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.6)
取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.7)
Na2HP6 2H2O,分子量=178.05 0.2mol/L溶液含35.61g/L
柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(0.1mol/L)
PH
0.1mol/L柠檬酸
(ml)
0.1mol/L柠檬酸
钠(ml)
37.5
62.5
7.8
91.5
8.5
6.8
49.0
51.0
8.0
94.7
5.3
Na2HPO4.2 H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/L
醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度,
也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不能配的太稀,否则缓冲能力要下降,太浓的话又浪 费试剂。
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaOH(ml)
0.2mol/L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(ml)
4.0
0.40
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60〜80ml,至溶液 从蓝色转变为纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.8)
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得。
0.1mol/L柠檬酸钠
(ml)
3.0
18.6
1.4
5.0
8.2
11.8
3.2
17.2
2.8
5.2
7.3
12.7
3.4
16.0
4.0
5.4
6.4
13.6
3.6
14.9
5.1
5.6
5.5
14.5
3.8
14.0
6.0
5.8
4.7
15.3
4.0
13.1
6.9
6.0
3.8
16.2
4.2
12.3
7.7
6.2
2.8
各种缓冲液的配制方法
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
0.2mol/LNa2HPO
(ml)
0.1mol/L柠檬酸 钠(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPC4
(ml)
0.1mol/L柠檬酸钠
(ml)
2.2
0.4
19.6
5.2
10.72
9.28
2.4
1.24
18.76
5.4
11.15
8.85
2.6
2.18
15.45
4.55
4.0
7.71
12.29
7.0
16.47
3.53
4.2
8.28
11.72
7.2
17.39
2.61
4.4
8.82
11.18
7.4
18.17
1.83
4.6
9.35
10.65
7.6
18.73
1.27
4.8
9.86
10.14
7.8
19.15
0.85
5.0
10.30
9.70
8.0
19.45
0.55
PH
0.2mol/LNaAC(ml)
0.2mol/LHAC(ml)
PH
0.2mol/LNaAC(ml)
0.2mol/LHAC(ml)
3.6
0.75
9.25
4.8
5.90
4.10
3.8
1.20
8.80
5.0
7.00
3.00
4.0
1.80
8.20
5.2
7.90
2.10
4.2
2.65
7.35
5.4
8.60