物理参数测试方法：参照《洁净室施工及验收规范》 的现行国家标准（ GB 50591-2010 )中附录方法
--高效空气过滤器完整性： 附录D3高效空气过滤器现场扫描检漏方法 --气流组织：附录E12气流的检测 --平均风速：附录E1风量和风速的检测 --压差：附录E2静压差的检测 --温度、相对湿度：附录E5温湿度的检测
5指手套等）
（四）监测
2、监测方法：
悬浮粒子：《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》 （GB/T16292-2010） 浮游菌：《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》 （GB/T16293-2010） 沉降菌：《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》 （GB/T16294-2010）
2、监测方法
•
2、起草背景
（2）国内背景
• • • • A) 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》 附录1：无菌药品 B) GB/T16292-2010 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的 测试方法 C) GB/T16293-2010 医药工业洁净室（区）浮游菌的 测试方法 D) GB/T16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的 测试方法
2、起草背景
（2）国内背景
• • • •
•
E) F) G) H) 境 I)
GB GB GB GB
50591-2010 洁净室施工及验收规范 50073-2013 洁净厂房设计规范 50457-2008 医药工业洁净厂房设计规范 25915-2010(ISO 14644) 洁净室及受控环
ChP（2010）药品微生物实验室规范指导原则
B) USP(35)〈1116〉：MICROBIOLOGICAL CONTROL AND MONITORING OF ASEPTIC PROCESSING ENVIRONMENTS 药品无菌操作环境的微生物控制和监测指导原则 C) ISO 14644 (1-8) Cleanrooms and associated controlled environments 洁净室及相关受控环境
（四）监测
培养基：一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）或含有 中和剂的TSA ，当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时， 可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)。 培养时间： ChP（2015） 3～5天 5～7天 GB/T 16293-2010 不少于2天 不少于5天
TSA： SDA：
（四）监测
空气流速
0.36-0.54 m/s（设施） 0.25-0.50 m/s（设备） 监测周期 12个月 ①单向流(静 态) 同上 ②非单向流 -
换气次数
-
压差
洁净区与 非洁净区 之间压差 不小于 10Pa; 不同级别 洁净区之 间的压差 不小于 10Pa 监测周期 每周一次
温度
相对湿度
B级
①单向流（ 静态） 监测周期 24个月 ②非单向流 非单向流 非单向流 -
3、起草原则
(1)国际化先进性原则 以USP(34)洁净室和其他受控环境的微生物学评估为主要参考 依据，起草我国药品洁净实验室微生物控制和监测的指导原 则。 (2)实践性和可操作性原则 从中国国情出发，结合及我国GMP(2010)及药品洁净实验室质 量管理实际，建立我国药品洁净实验室微生物控制和监测的 指导原则。 (3)行业间标准和方法的融合、协调和统一原则 药品检测标准方法（ChP）与药品生产行业要求(GMP）、国家 标准（GB）等协调融合，物理参数、悬浮粒子、微生物测定 方法直接引用GB，指导原则可操作性强、切实可行。 (4)检测环境与生产环境相一致的原则
•
•
2、起草背景
（1）国际背景
•
D)美国FDA ISPE（2004年） 《工业指南-用无菌工艺生产的无菌药品》 E) WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories 药品微生物实验室良好实施规范 2. Environment 环境
1 10 100 200
沉降菌（90mm） 表面微生物 cfu /4小时(2) 接触（55mm） 5指手套 cfu /碟 cfu /手套
1 5 50 100 1 5 25 50 1 5 － －
注：（1）表中各数值均为平均值；（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时， 同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
①单向流 ②非单向流 40-60h-1 监测周期 12个月 20-40h-1 监测周期 12个月 6-20h-1 监测周期 12个月
18-26℃ 监测周期 每次实验
45-65% 监测周期 每次实验
C级
D级
-
（四）监测
1、监测内容： 空气悬浮粒子数（非生物活性） 微生物（有生物活性） —环境浮游菌 —环境沉降菌 —表面微生物（关键检测台面、人员操作服及
3、监测频次及监测项目
参考GMP(2010)及GB50073-2013，见表2
检测频次的调整
如果出现连续超过纠偏限和警戒限、关键区域内发现有污染存在、空气 净化系统进行任何重大的维修、消毒规程改变、设备有重大维修或增加、洁 净室（区）结构或区域分布有重大变动、引起微生物污染的事故、日常操作 记录反映出倾向性的数据时应考虑修改监测频次。
注：①每月一次。 ②工作台面沉降菌的日常监测采样点数不少于3个，且每个采样点的平皿数应不小于 1个。③每季度一次。 ④每半年一次。
（四）监测
4．监测标准 参考GMP（2010），见表3、表4
表3：各洁净级别空气悬浮粒子的标准
洁净度级别
悬浮粒子最大允许数/立方米
静态 ≥0.5μm ≥5.0μm
20 29 2900 29000
4、内容介绍
框架（五部分）
前言 人员 确认
应用范围、药品洁净实验室及洁净级别、监测和控 制的目的、主要内容概述 监测和控制人员要求 初次使用的洁净实验室参数确认
监测
监测方法、监测标准 、警戒限和纠偏限 、数据分 析及偏差处理 、微生物鉴定
微生物控制手段
微生物控制
（一）前言
应用范围：本指导原则是用于指导药品微生物检验用的洁 净室等受控环境微生物污染情况的监测和控制。 药品洁净实验室及种类：药品洁净实验室是指用于药品无 菌或微生物检验用的洁净实验室、隔离系统及其它受控环境。
空气悬浮粒子和微生物的确认: 见“监测”项下。 物理参数建议标准： 参照GMP(2010)、FDA(ISPE，换气次数) 最长监测周期： 参照GB,详见表1
表1：各级别洁净环境物理参数建议标准及最长监测周期
洁净级别 过滤完整性 气流组织
A级 单向流 监测周期 24个月 检漏试验 监测周期 24个月
（二）人员
从事药品洁净实验室微生物监测和控制的人员应符 合2015年版《中国药典》中“通则1921 药品微生物实 验室质量管理指导原则”的相关要求。
（三）确认
确认目的：确保操作顺畅，保证设备系统的运行能力和可 靠性。 确认时间：初次使用的洁净实验室应进行参数确认，物理 参数的测试应当在微生物监测方案实施之前。 确认参数：物理参数、空气悬浮粒子和微生物 —物理参数：高效空气过滤器完整性，气流组织、空 气流速，换气次数、压差、温度和相对湿度等。 —微生物：浮游菌、沉降菌、表面微生物 测试条件：模拟正常检测条件
（四）监测
表2：推荐的药品洁净实验室的监测频次及监测项目
受控区域
内部
无菌隔离系统 A级 微生物 洁净实验室 B级 C级 D级 每次实验 每周一次 每季度一次 每半年一次
采样频次
每次实验
监测项目
空气悬浮粒子① 、浮游菌④ 、沉降菌② 、表面 微生物（手套）
空气悬浮粒子① 、浮游菌④ 、沉降菌② 、表面 微生物（含手套及操作服） 空气悬浮粒子③、浮游菌③ 、沉降菌、表面微 生物（含手套及操作服） 空气悬浮粒子④ 、浮游菌④ 、沉降菌、表面微 生物 空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物
动态 ≥0.5μm
3520 352000 3520000 不作规定
≥5.0μm
20 2900 29000 不作规定
A级 B级 C级 D级
3520 3520 352000 3520000
（四）监测
4．监测标准
表4：各级别洁净环境微生物监测的动态标准(1) 洁净度 级别
A级 B级 C级 D级
浮游菌 cfu/m3
表面微生物（环境、设备和人员） 接触碟法：将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面 或平面进行取样，然后置合适的温度下培养一定的时间并计数， 每碟取样面积为约25 cm2，微生物计数结果以CFU/碟报告。 擦拭法：用于不规则表面的微生物监测，特别是设备的不 规则表面。擦拭法是采用合适尺寸的无菌模板或标尺确定擦拭 的面积，取样后，拭子置合适的缓冲液或培养基中，充分振荡， 再用适宜傅的方法计数，每个拭子取样面积为约25 cm2，微生 物计数结果以CFU/拭子报告。 表面微生物测定应在实验结束后进行。
（四）监测
表5：各级别洁净环境微生物纠偏限参考值
洁净度级别
A级 B级 C级 D级
浮游菌纠偏限（1） （cfu/m3）
1 （ 3） 7 10 100
沉降菌纠偏限（2）（90mm， cfu/4小时）
1 （ 3） 3 5 50
注： （1）数据表示建议的环境质量水平，也可根据检测或分析方法的类型确定微生物纠偏限度标准。 （2）可根据洁净区域用途、检测药品的特性等需要增加沉降碟数。 （3）A级环境的样品，正常情况下应无微生物污染。
（四）监测
6.数据分析及偏差处理 参考USP(35)
（1）数据分析 应当对日常环境监测的数据进行分析和回顾，通过收集的 数据和趋势分析，总结和评估无菌生产环境或洁净实验室是否 受控，评估警戒限和纠偏限是否适合，评估所采取的纠偏措施 是否合适。 应当正确评估微生物污染，不仅仅关注微生物数量，更应 关注微生物污染检出的频率，往往在一个采样周期内同一环境 中多点发现微生物污染，可能预示着风险增加，应仔细评估。 几个位点同时有污染的现象也可能由不规范的采样操作引起， 所以在得出环境可能失控的结论之前，应仔细回顾采样操作过 程。在污染后的几天对环境进行重新采样对于调查污染原因意 义不大，因为采样过程不具有可重复性。