实验课题：观察DNA和RNA在细胞中的分布 一、实验原理 1.碱性染料能使核酸着色，甲基绿和吡罗红均为碱性染料； DNA﹢甲基绿→绿色，RNA ﹢吡罗红→红色。 甲基绿与吡罗红作为混合染料使用可显示细胞中DNA和RNA在细胞中的分布。 2.盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与 蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
紫色
乙液CuSO4溶液浓度为 B液CuSO4溶液浓度为 0.05 g/mL 0.01 g/mL
都含有NaOH溶液、CuSO4溶液两种成分，且所 用NaOH溶液浓度都是0.1 g/mL
实验——绿叶中色素的提取和分离 实验原理：色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中
实验关键点 ： 1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶等。 2.画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须 等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。 3.层析时不要让滤液细线触 及层析液。
观察
生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质和DNA的鉴定
鉴定物质 还原性糖 脂肪 蛋白质 淀粉
Hale Waihona Puke 试剂 斐林试剂 苏丹Ⅲ 苏丹Ⅳ 双缩脲试剂
实验现象 砖红色沉淀
橘黄色
红色 紫色 蓝色
碘
还原性糖+斐林试剂→砖红色沉淀 还原性糖：葡萄糖、麦芽糖、果糖 非还原性糖：蔗糖、淀粉等
水浴加热
+
→
脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色 脂肪+苏丹Ⅳ→红色
问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出 一部分样液？ 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能 过量？
过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，
而掩盖生成的紫色。
3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而 无法参与反应。
取少量脂肪样液，加入苏 丹Ⅲ，震荡，可看到溶液 呈了橘黄色，本实验我们 用苏丹Ⅲ做染液。
蛋白质+双缩脲试剂→紫色络合物
豆浆、蛋清、牛奶都是很 好的实验材料。
本实验我们用蛋清做实验材料， 在用蛋清做实验材料时，要注意 将蛋清稀释，如果稀释不够，反 应后的产物会粘固在试管内壁上， 使反应不容易彻底。
深化
绿叶中的色素不止一种，他们都能溶解在层析液中。然而，它们在层析液中的溶 解度不同；溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快；反之则慢。这样，几分钟之 后绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。且溶解度最高的是胡 萝卜素，它随层析液在滤纸上扩散的最快；叶黄素和叶绿素a的溶解度次之，叶 绿素b的溶解度最低，扩散的最慢。
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
使用方 法
呈色反 应条件 不 同 反应原 点 理 颜色 浓度 相同点
甲液和乙液混合均匀后 使用时先加A液再加B 方可使用，且现配现用 液
需水浴加热 不需加热即可反应
还原糖中的醛基被 Cu(OH)2氧化， Cu(OH)2被还原为 Cu2O
砖红色
具有两个以上肽键的化 合物在碱性条件下与 Cu2＋反应生成络合物
实验总结
（1） 在研磨绿叶时，加入少许SiO2是为了研磨得充分，加入少许的CaCO3是为了防止研磨过程中色素受到破坏，加入10ml无水乙醇是使色素溶解在 其中，便于提取； （2） 因无水乙醇和层析液都是易挥发且层析液是有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶 剂的挥发。 （3）用毛细吸管画滤液细线时，线条越细越直效果越好，重复划几次的目的是使滤液细线中含有较多的色素 （4）如果层析液浸没了滤纸条上的滤液细线，滤纸条上就不会出现色素带，其原因是滤液细线中的色素溶解在了烧杯中的层析液中，会导致色素带不 清晰，影响整个实验的效果。
补：高温﹑酸﹑碱等条件能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞。
我们观察到细胞核中的DNA被染成绿色 而细胞质中的RNA被染成红色。
步骤总结
操作步骤 注意问题 解释
防止污迹干扰观察效果 保持细胞原有形态 消毒为防止感染，漱口避免取 材失败 固定装片 改变细胞膜的通透性，加速染 色剂进入细胞，促进染色体 的DNA与蛋白质分离而被染 色 洗去残留在外的盐酸 载玻片要洁净，滴一滴质量分数 取口腔上 为0.9%的NaCl溶液 皮细胞 用消毒牙签在自己漱净的口腔内 制片 侧壁上轻刮几下取细胞 将载玻片在酒精灯下烘干 水解 冲冼涂片 染色 将烘干的载玻片放入质量分数为 8%的盐酸溶液中，用300C水浴 保温5min 用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片 滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片 上染色5min 先低倍镜观察，选择染色均匀、 使观察效果最佳 色泽浅的区域，移至视野中央， 调节清晰后才换用高倍物镜观 察