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亚硝酸还原酶测定

土壤亚硝酸还原酶
原理:
此方法基于通过NO2-N与格里试剂反应所产生的颜色深浅测定酶促反应前后NO2-N变化用于表征亚硝酸还原酶活性。

试剂:
1.0.5%NaNO2溶液
2. 1%葡萄糖
3. caco3
4. 铝钾矾饱和溶液
5. 格里试剂
A: 0.1% X-萘胺溶液AB用乙酸相对密度1-04配制(冰乙酸)
B:0.5%对氨基苯磺酸溶液
使用时AB 等体积混合。

6. NaNO2标准溶液
称取 1.500g分析纯亚硝酸纳于烧杯中,加水洗入 1 L定量瓶。

用时此溶液配成稀溶液(0.01mg/ml)
步骤
1)称取1g过1mm筛风干土置于100ml减压三角瓶中,加入20mgcaco3和1ml
0.5%NaNO2,摇匀后加入1ml 1%葡萄糖溶液
2)抽真空3min,置于培养箱30度,24h
3)培养结束后,加入50ml水,1ml铝钾矾溶液,摇匀,过滤
4)取1ml滤液至50ml容量瓶中,加入5ml水和4ml格里试剂混匀,显色,定色至50ml、5)在550-600nm处进行比色
6)根据反映前后NO2-N量的差值,计算酶活性。

7)以10g土壤24h还原NO2-N毫g数表示土壤亚硝酸还原酶
8)Mg NO2-N/10g干土24h=(M0-Ma)*10/m
9)无基质对照(与试验同)无土对照2个。

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