浓盐法：是用高浓度盐溶液（6%~8%）处理，同 时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释 放出来。
要避免分子降解，可采用苯酚法制备RNA。用苯 酚处理生物材料使蛋白质变性，然后离心，上层水 溶液内含有全部RNA，可用乙醇沉淀出来。
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脱氧核糖核蛋白溶于浓盐溶液1mol/L,不溶于 0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L盐溶液。
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（二）发酵法生产核苷酸 1．发酵法生产肌苷酸（IMP） 2、发酵生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸
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（三）半合成法制备核苷酸
由于发酵法生产核苷的产率很高，核苷悬浮于磷酸 三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷， 进行磷酸化，从核苷生成5′-核苷酸收率可达90%。
（4）RNA的提取实例：啤酒酵母是提取RNA的 很 好 的 资 源 。 取 100g 压 榨 啤 酒 酵 母 （ 含 水 份 70%），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以下缓 慢搅拌30分钟。用6mol／L HCl调至pH7，搅拌15 分钟，离心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol ／L HCl调pH2.5，置冷过夜，离心得RNA l.8g （纯度80％）。
磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA 可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法 生产5‘-核苷酸。
（1）菌体自溶法生产核苷酸工艺流程：
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5．碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸
RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定， 很容易生成2′，3-环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更 不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。 取 RNA 配 成 3 ％ ～ 3.5% 的 水 溶 液 ， 加 氢 氧 化 钠 达 0.3mol／L浓度，升温至38℃，保温16～20小时，用 6mol／L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2′，3＇核苷酸的降解率达95％以上，将2′，3＇-混合核苷酸 制成每片含50～100mg的片剂，经临床使用，对非特 异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和 放疗后的升白血球均有较好疗效。
通 常 在 细 菌 中 RNA 占 5 ％ ～ 25 ％ ， 在 酵 母 中 占 2.7 ％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。
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在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中 关键是铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率 高，易于提取RNA。
很显然在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高， 其确切数值取决于碳、氮比例和培养基组成等。
干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制备需在0～
3℃操作）。
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二、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸
桔青霉产生5`-磷酸二脂酶 红酵母产生3`-磷酸二脂酶
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2、酶解法制备戊糖核苷酸
我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产 单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸） 3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。
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2、具有生物活性DNA的制备
动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水经
组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分钟，
沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗后离心，
将沉淀悬浮于20倍重量的冷生理盐水中，再捣碎3分
钟，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶剂）十二烷基
磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／pm离心，在
例一：肌苷2mmol／L悬浮于5ml磷酸三乙酯中，温度 控制0℃，添加氯化氧磷6mmol／L，水2mmol／L， 反应2h，5＇-IMP摩尔产率达91％。
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（二）DNA的提取与制备
1．工业用DNA的提取
取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状， 加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌， 升温至100℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25℃， 离心除去鱼精蛋白等沉淀物，获得35L含热变性DNA 的溶液，经精确测定DNA含量后直接可用于酶法降解 生 产 脱 氧 核 苷 酸 。 如 要 制 成 固 体 状 DNA ， 在 热 变 性 DNA溶液中逐渐加入等体积95％乙醇，离心可获得纤 维状DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得 DNA粗品，产品含热变性DNA50％～60％。
第十二章 核酸类药物
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第一节 核酸类物质的分离提取及其发酵生产
一、RNA与DNA的提取与制备
（一）RNA的提取与制备
1、工业用RNA的提取
（1）RNA及其工业来源 从微生物中提取RNA是工 业上最实际和有效的方法。一些最常见的菌体含有丰 富的核酸资源，如酵母、白地霉、多种抗菌素的菌丝 体——青霉素，制霉菌素等菌体。
上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可得到纤
维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得
粗品DNA。粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5％十二
烷基磺酸钠达1／10体积，搅拌1小时，经5000r／pm
离心1小时，清液中加入NaCl达1mol／L，再缓慢加
入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗涤，真空
（2）高RNA含量酵母菌株的筛选 可以从自然界筛选 到RNA含量高的酵母菌株，也可用诱变育种的方法 提高酵母菌的RNA含量。
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稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变 性，使核酸从细胞内释放出来。需用酸中和pH7。然 后除去菌体，将pH调至RNA的等电点（pH2.5），使 RNA 沉 淀 出 来 。 上 法 的 缺 点 是 制 得 的 RNA Mr 较 低,(磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 ℃保持 3~4h破坏酶)。
酶解法生产5‘—单核苷酸工艺流程
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3、双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G）
呈味核苷酸的主要品种是肌苷酸钠和鸟苷酸钠， 商品名简称为（I＋G），用核酸酶Pl降解RNA可获得 GMP和AMP，其中AMP经脱氨生成IMP。双酶法生 产（I十G）工艺 。
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4．菌体自溶法生产核苷酸