上海交通大学细胞与分子生物学实验报告系级班学号姓名编写说明适应实验教学的改革，提高实验教学的质量，实验教学是强化理论课的重要方式，是培养医学生实验科学概念和实验技能的重要途径。
更重要的是，实验教学是培养学生综合分析和解决问题的能力以及科学创新能力的重要方式。
实验课是实现理论联系实践，培养学生创新能力应用能力的重要方式。
通过实验教学，一方面使学生巩固所学理论，另一方面培养学生实践操作技能和方法，同时也训练了学生运用综合技能的能力。
对学生培训这方面的能力。
细胞与分子生物学教学实验涵盖了生物化学与分子生物学、医学遗传学、医学免疫学和细胞生物学等4个与分子生物学和细胞学相关的学科，已开设了与这些学科密切相关的基础实验课和多学科综合的综合实验课，以及融合了相关实验室技术的融合综合实验。
我们教学实验室编写这本实验报告的初衷是在减少学生的课业负担的同时，将实验中相对重要的实验原理、关键步骤、实验数据、实验结果和实验结果分析编排统一格式，一方面学生可以将实验中观察到的现象“记录在案”，另一方面培养学生科学研究档案记录的严谨性和记录实验过程的规律性，力求能给学生在实验训练上有一个比较系统的、实用的基本训练。
实验报告初次编写，有疏漏之处请使用者多多指教，以期进一步完善。
卢健细胞与分子生物学教学实验室2008.5目录一、基础实验（一）电泳技术实验一血清蛋白醋酸纤维簿膜电泳实验二聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离蛋白质实验三血清脂蛋白琼脂糖电泳（二）层析技术实验四凝胶柱层析分离鉴定蛋白质实验五DNS-氨基酸的双向聚酰胺簿膜层析实验六离子交换层析分离氨基酸（三）离心技术实验七差速离心法从鼠肝中提取核糖核蛋白体和核蛋白体RNA 实验八蔗糖梯度离心法分部离心核糖核酸（四）PCR体外扩增技术实验九逆转录PCR实验十定量PCR实验十一PCR单链构象多态性分析（五）其他基本实验技术实验十二微量淋巴细胞毒试验实验十三 ELISA技术及Western blot技术实验十四流式细胞术实验十五细胞培养实验十六显微镜使用实验十七染色体分析实验十八图象分析/电镜观察实验十九凝集试验二、综合实验实验二十检测鼠肝肌动蛋白（ß-actin）基因1．鼠肝DNA的制备2．PCR技术检测ß-actin基因3．琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段4．southern杂交鉴定DNA片段实验二十一兔肝碱性磷酸酶（AKP）的纯化及Km的测定1．有机溶剂法部分纯化兔肝AKP2．AKP比活性测定3．DEAE纤维素（DE-52）离子交换层析进一步纯化AKP 4．AKP Km 测定实验一血清蛋白醋酸纤维簿膜电泳一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1.血清蛋白在醋酸纤维薄膜上可分成5~7条带，每条区带是否分别只代表一种蛋白质？2.用什么方法可证明醋酸纤维薄膜有无电渗作用？3.电渗强度愈高血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的泳动率愈高，是否电场愈高愈好？教师日期实验二聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离蛋白质一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1. 试比较聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳有何不同？2.血红蛋白为何能在等电聚焦电泳中分成三条区带？3. 等电聚焦电泳具有极高的分辨率，所以它是蛋白质纯度可信的方法。
你认为这种做法对么？教师日期实验三血清脂蛋白琼脂糖电泳一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1.为什么正常人血清脂蛋白电泳时见不到乳糜微粒区带？教师日期实验四凝胶柱层析分离鉴定蛋白质一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1．小结己知的分离蛋白质的生化方法有哪些?2..盐析法沉淀蛋白质后，常用透析法脱去蛋白质中的盐份，此外，你认为还可用什么方法脱盐。
为什么？3. 经测定甲蛋白kd=0，乙蛋白kd=0．75，试问：(1)甲乙二蛋白哪一个先从凝胶层析柱上洗脱下来?(2)甲乙二蛋白哪一个大，哪一个小，为什么?教师日期实验五DNS-氨基酸的双向聚酰胺簿膜层析一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1.本实验分离混合氨基酸的基本原理是什么?其中流动相和固定相分别是什么，各起什么作用?2.本实验操作时需注意哪些问题？3. 由标准DNS-氨基酸单向层析图谱可见，丝氨酸的Rf值再甲酸-水溶剂系统中远较苯-冰醋酸熔剂系统中大，为什么？4.本方法能否用于分离核苷及核苷酸，为什么？教师日期实验六离子交换层析分离氨基酸一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1.简述离子交换层析的原理。
2. 为什么第一峰为Asp，第二峰为Gly，第三峰为Lys？教师日期实验七差速离心法从鼠肝中提取核糖核蛋白体和核蛋白体RNA一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题教师日期实验八蔗糖梯度离心法分部离心核糖核酸一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题教师日期实验九逆转录PCR 一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题教师日期实验十定量PCR （示教）一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题教师日期实验十一PCR单链构象多态性分析（示教）一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题教师日期实验十二细胞膜表面抗原检测—补体依赖的微量淋巴细胞毒试验一、实验原理二、实验步骤三、实验数据按下表，记录各孔死细胞百分率。
反应孔 1 2 3 45对照孔1 2 3 4 5死细胞数（%）死细胞数（%）记分记分对照CDC统一记分法，判别实验结果。
死细胞百分数记分意义0~10 1阴性（－）11~20 2可疑阴性（±）21~40 4弱阳性（＋）41~80 6阳性（＋＋）81~100 8强阳性（＋＋＋）无效（O）四、实验结果四、思考题1．本次实验中抗原、抗体分别是什么？最终细胞是如何死亡的？教师日期实验十三实验A 酶联免疫吸附试验（ELISA）—双抗体夹心法一、实验原理二、实验步骤三、实验数据四、实验结果五、思考题1．酶联免疫吸附试验（ELISA）共有几种类型的检测方法？试比较这些方法各有什么特点？实验十三B实验免疫印迹试验（Western blot）六、实验原理七、实验步骤八、实验数据九、实验结果十、思考题1．转迹、封闭、杂交、洗涤、显色、终止和脱色的含义及意义教师日期实验十四流式细胞术（示教）一、流式细胞仪基本工作原理二、如何应用流式细胞仪检测凋亡细胞教师日期实验十五细胞培养一、细胞原代培养概念和基本流程二、细胞培养原代分离和传代培养技术实验步骤三、细胞培养原代分离和传代培养技术步骤四、细胞培养原代分离和传代培养技术教师日期实验十六显微镜使用一、普通光学显微镜的主要构造及其性能二、兔脊高尔基体、小鼠线粒体、蛙卵母细胞的切片观察三、思考题（一）观察细胞器的超微结构一般要利用下列哪种技术________ A．光学显微镜技术 B．电子显微镜技术C. 流式细胞技术 D．电泳技术 E. 图像分析技术（二）细胞凋亡有哪些特征教师日期实验十七染色体分析一、外周血染色体制备技术原理二、外周血染色体制备技术关键步骤三、人类染色体分组的依据是：四、实验结果（一）记数细胞内染色体数并作出统计；染色体 <45 45 46 >47 细胞总数————————————————————————细胞数（二）绘出细胞内的染色体简图————————————————————————————1———A———3 4———B———5 6———————C———————12 —————————————————————————————13———D———15 16——E———18 —————————————————————————————19—F—20 21—G—22 性染色体注意：染色体剪下后，按大小、顺序及着丝点位置排列在各组位位置上，着丝点部位对准小圈点。
（三）染色体核型分析报告照片编号__________________________________________________________ 临床诊断___________________________________________________________ 核型分析结果_______________________________________________________班级_______________________ 鉴定者_____________________________————————————————————————————1———A———3 4———B———5 6———————C———————12—————————————————————————————13———D———15 16——E———18 ———————————————————————————————19—F—20 21—G—22 性染色体注意：染色体剪下后，按大小、顺序及着丝点位置排列在各组位位置上，着丝点部位对准小圈点。
完成日期年月日教师日期（四）染色体核型分析报告照片编号__________________________________________________________ 临床诊断___________________________________________________________ 核型分析结果_______________________________________________________班级_______________________ 鉴定者_____________________________完成日期年月日教师日期五思考题（一）人类非显带染色体分组依据是：A.染色体的相对长度B.染色体着丝粒的位置C.随体的有无D.染色体短臂与长臂之比E.染色体长臂与短臂之比（二）人类染色体分组的依据是什么？（参见P68-69）（三）常用的染色体显带技术有哪几种，试述其各自的特点。
（参见P70-72）教师日期。