DDR2
EGFRvIII
EGFR1
未知
大细胞癌
腺癌
鳞癌
VEGFR AKT PDGFR
FGF R INSR
RET
EGF R
未知
B-raf
K-ras
鳞癌 腺癌
8/28/2015
病理分型
分子分型
EGFR信号通道
8/28/2015
EGFR基因突变检测是NSCLC靶向用药的必检项目
8/28/2015
EGFR酪氨酸激酶区突变种类
*5）的患者比非携带者有更高的心血管不良事件发生的风险。这种风险在做冠脉支 架术的病人中更为显著。
昶通医疗
CYP2C19基因检测
CYP2C19(*2, *3, *4, or *5)携带其中任何二个等位基因个体，比非携带者风险增加3.58倍！
昶通医疗
◄ CYP2C19基因检测指导氯吡格雷使用实践 CYP2C19基因检测
doi:10.1136/heartjnl-20aul S, et al. J Am Coll Cardiol 2010;56:321–41
第四节
肿瘤靶向药物基因检测
肿瘤晚的期病NS理CL分C的型治和疗分现子状分型
EGFR PIT3KKCA
43
基本流程
c.2573T>G (p.L858R)
标本
DNA测序
基于PCR技术
候选人群筛查
Re提al取-time实D时NAPCR
DNA测序 荧光PCR-优化寡核苷酸探针法
液相芯片
（Pyrosequencing）
焦磷酸测序
其它技术
双环引物与探针法
L858R(21外显子
Taqman-ARMS法
DNA提取
耳聋基因 GJB2，SLC26A4，12SrRNA检测
GJB2的突变是导致先天性耳聋的主要原因； SLC26A4是导致迟发型耳聋的主要基因； 12SrRNA是导致药物性耳聋的主要基因。
—HBV高精度、HCV高精度、HBV分型与耐药、HCV分型
HBV基因（载 量）
耐药位点突变 （YMDD）
未突变或非耐 药位点突变
停用对应耐药 药物
可以继续使用 此类药物
8/28/2015
HCV基因（载 量）
HCV基因分型
制定治疗方案
第三节
个性化用药
20
个体化用药
循证医学
病人
A药
ADR
健康体系
B药
位点：5个SNP位点
靶基因
CYP450 2C9 VKORC1
等位基因位点
430C>T(﹡2) 1075A>C(﹡3) 1080C>G(﹡5) 1173C>T -1639G>A
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华法林敏感性检测
◄ CYP2C9和VKORC1基因多态性——华法林敏感性
昶通医疗
◄ 细胞色素P450代谢细胞内药物反应 CYP2C19基因检测
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◄ 临床上常用的经由CYP2C19代谢的药物
CYP2C19基因检测
血小板凝集抑制剂 氯吡格雷
质子泵抑制剂
奥美拉唑；兰索拉唑；泮托拉唑
抗抑郁药
氟西汀；西酞普兰；艾司西酞普兰；阿米替林；氯米帕明、西咪嗪；吗氯贝胺；曲米帕明；依替唑仑
抗癫痫药
安定；氯巴占；苯妥英钠；苯巴比妥；丙戊酸
抗肿瘤药
环磷酰胺
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◄华法林作用机理
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华法林敏感性检测
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◄ CYP2C9和VKORC1基因多态性——华法林敏感性
凝血酶原时间 (PT) 国际标准化比率 (INR)
VKORC1、CYP2C9
更有效、迅速地调整华法林维持剂量 达到疗效的同时减少华法林的出血风险
Warfarin敏感性基因检测试剂盒
检测目的基因：CYP2C9 和VKORC1
l 疗效不同-浪费资源和时间 l 常见和不可预知的药物不良反应
循证医学
个体化医学
个体化用药
病人
分子诊断
目标药
ADR
l 量体裁衣治疗 l 提高疗效，减少不良反应
常见个体化用药检测： l 氯吡格雷多态性基因检测等 l 华法林敏感性基因检测等 l 阿司匹林用药基因检测等
21
◄ CYP2C9和VKORC1基因多态性——华法林敏华感法性林敏感性检测
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u细胞色素P450(Cyp450s)是改变药物化学结构以利于排 除的酶类。
u定位于肠壁、内皮组织、肝和其他组织的细胞内，有50 种以上的基因表达。
ucyp450结构，表达和功能的遗传差异导致药物和营养吸 收、清除的不同。
uCYP450系统主要有CYP1A2、2A6、2B6、2C、2D6、 2EI和3A等，它们分别占肝脏P450总量的13%、4%、 0.2%、20%、l-2%、7%和30%。
精准医学概念
建立在了解个体基因、环境以及生活方式基础上， 预测疾病的易感性，对疾病进行特异性诊断，评估药物 的反应性，并依此为患病个体制定特异性治疗方案，真 正做到“精准用药”和“少用药”
精准检测
精准治疗
基因检测的目的
疾病诊断及分型
治疗及预后判断
风险预测
第二节
感染性疾病分子诊断
7
精准的乙肝治疗方案依赖精准的HBV-DNA检测
灵敏度很高，高耐受PCR抑 制剂，绝对定量，分析自动 化，直接计算靶点突变率
根据图谱不能判断特异 性的变异体，需测序辅 助
核酸浓度高的样本不合 适，重复性差，目前用 于科研的较多
可多种标记荧光，空间定 对操作和判读要求比较
位，可以检测复杂核型
高
灵敏度 20% 10% 10% 1% 1%
0.001-0.0001% ~
氯吡格雷无效风险大大增加， 易发生心血管事件。 考虑换用新药替格瑞洛（已在 国内上市）或普拉格雷 PCI术后联用其他抗血小板药 物，如西洛他唑，双联抗血小 板治疗改为三联治疗。
昶通医疗
SA Scott, K Sangkuhl, EE Gardner, et al. Clinical Pharmacology & Therapeutics 2011;4 accept Chen Hui, et al. Heart 2011;97:A107
0.8
Probability 0.6 of PFS
0.4
0.2
0.0 0
4
8
12
16
20
24
Time from randomisation (months)
影响EGFR基因突变检测结果的因素
Ø 肿瘤异质性 临床样本中肿瘤细胞与正常细胞混杂
遗传异质性
正常细胞混杂
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Ø 常用检测方法
方法学
优势
局限
Sanger测序 焦磷酸测序 新一代测序 ARMS-PCR HRM 数字PCR 荧光原位杂交
检测的CYP2C19基因分型 *1(野生型) *2(c.681G＞A) *3(c.636G＞A)
S-美芬妥英羟化酶 正常酶活 酶丧失活性 酶丧失活性
东方人弱代谢表型 (PM)的99％以上
FDA建议药师可以通过检测CYP2C19的基因型来了解患者波立维的代谢能力，对于波立维 弱代谢者可给患者选用其它抗凝血药物。
基因分型金标准，测序长度 长
金标准，测序长度较Sanger 短
对样本要求肿瘤细胞含 量大于50%
不能做长片段分析
同时大规模平行测序，可反 映DNA丰度
检测灵敏度与测序深度 相关；已知驱动基因数 量有限
灵敏度高，可检测到肿瘤细 只能检测已知位点的突
胞中突变比例低于1%
变类型
灵敏度高，特异性强，扩增 和检测同时进行
• 病毒检测方法学 高敏感检测方法是丙肝疗效判定、RGT执行的关键因素
HCV RNA灵敏度可能导致部分pEVR患者被误判 为cEVR
16
pEVR误判为cEVR 可能导致所谓的“复发率” 升高
17
pEVR患者有必要延长疗程 延长HCV RNA阴 性维持时间有助于减少复发，获得SVR
18
感染性疾病分子诊断
基因检测
结果分析/检测报告
4.血液病分子诊断 5.遗传学分子诊断检测
—慢性粒细胞白血病（CML）
—男性生精障碍&遗产病检测
BCR/ABL融合基因 表达阳性
Y染色体微缺失检测
AZF基因家族共有AZFa、AZFb、AZFc三 个座位，其中任何一个座位的微缺失都 可导致生精障碍
慢性粒细胞白血病检测标志 物，同时在ALL，AML等疾 病也有表达
氯吡格雷只有在肝脏中转化为有活性的代谢产物后，才能激发药物活性。
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◄ CYP2C19基因分型与氯吡格雷用药剂量控制 CYP2C19基因检测
p 氯吡格雷（波立维）是目前世界范围内使用最广泛的噻吩吡啶类抗血小板药，用于急 性冠脉综合征、冠脉支架术和冠心病的一级二级预防，可以减少心血管疾病患者心脏 病发作、卒中以及死亡的风险。
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主要终点事件
血栓再发率
CYP2C19基因检测
研究数据表明：在接受氯吡咯雷治疗的人群中，CYP2C19基因突变者支架血栓形成和死亡风 险均显著高于非突变患者。
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CYP2C19基因检测
法国：2208个急性心梗患者 对于因为急性心梗而服用氯吡格雷的病人，那些携带CYP2C19基因突变（*2、*3、*4、
◄ CYP2C19中国人群突变频率
CYP2C19基因检测
基因型 *1/*1（636GG,681GG
） *1/*2(636GG,681GA)
*1/*3(636GA,681GG)
*2/*2(636GG,681AA)
*3/*3(636AA,681GG)