高 高 长 高 重 高（高年龄组高） 低 低 差 差
HBV变异的基础
• 乙肝病毒:高变异性 1/105 • 24h 一万亿-十万亿拷贝*变异：一千万—一亿 • 复制过程:DNA-RNA-DNA • HBV逆转录酶:缺乏严格的校正机制 • 变异:自然变异,免疫压力等等
乙肝病毒P区耐药
原本有效的药物 对发生耐药变异后的病毒束手无策
Q3
Cobas®
高灵敏度 乙肝：20 IU/mL
准确判断治疗起点/终点
线性范围 乙肝：20-1.7×108 IU/mL
每批试剂均使用 WHO标准品校准
每个样本使用同 源性内标定量
极佳的重复性，结果可靠 正确指导抗病毒治疗
保证定量结果的准确性 和可溯源性
避免结果不准确
采用AmpErase酶
减少交叉污染
治疗终点
HBsAg 清除及血清学转换
组织学改善
cccDNA 清除
HBV DNA 降低/消失
*Lok, A.S.F et.al. “Chronic Hepatitis B: Update 2009.” HEPATOLOGY, Vol 50, No. 3, 2009, pgs 8-9
治疗终点
• 2009年EASL指南提出的治疗终点： • 最理想的治疗终点：持续的HBsAg 消失，伴
继续治疗 每6个月监测HBV DNA
部分病毒学应答 60 – 2,000 IU/mL
加其他药物治疗 每3个月监测HBV DNA
*Keefe, E. Clin Gastro Hepatology. 2007; (5):890-897.
不充分病毒学应答
>2,000 IU/mL
改用或加用更强药物 每6个月监测HBV DNA
变异前，药物有效抑制病毒
变异后，药物对病毒束手无策
P区耐药位点检测
HBV病毒耐药性检测
• 长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引 起耐药的基因突变位点主要集中于P区
• 原因：抗病毒药物作用在病毒P区药物靶点上， 引起相关基因变异，使得药物与相关靶点作用 下降，进而产生耐药。
或不伴抗HBs 抗体出现。 • 满意的治疗终点：在HBe Ag 阳性患者中，出
现持续降低病毒DNA
水平（降至实时定量 PCR检测限以下：1015IU/ml）
HBV基因分型
根据HBV全基因核苷酸序列的差异，分为不同 基因型:A.B.C.D.E.F.G.H共8个型
• QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS 系统是美 国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具 有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、 F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。
• 由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x 103 copies／mL～1.0x 108 copies／mL， 对于低于1.0 x 103 copies／mL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏 检的可能。 而COBAS 系统线性范围为20-1.7×108 IU/mL，因此， COBAS 系 统更能准确反映血清HBV DNA含量。
P区耐药检测
抗药性监测 治疗药物选择
C区启动子变异
确定病毒变异
S 区变异
确定隐觅性病毒
类型
变异
判断治疗效果
判断疫苗效果 判断肝炎预后
确定治疗方案
高灵敏度乙肝DNA检测
• 高精度病毒载量检测系统 （ COBAS AmpliPrep/Cobas TaqMan ）
高灵敏度乙肝DNA检测优势
• 定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度， 对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。
肝炎的分子诊断与 临床应用
我国乙肝病毒感染率概况
我国乙肝病毒感染率概况
《2006－2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》 显示，中国是乙型肝炎病毒感染和发病人数最多的国 家，全国有6.9亿人曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人 长期携带乙肝病毒。
目前全国慢性乙肝病人2000万人，每年死于与乙 肝相关的肝病患者达28万例，发病率和死亡率都位居 前三位。每年造成的直接经济损失约达3600亿元人民 币。
抗病毒治疗应将HBV DNA降至尽可能低的浓度，理想是低于实时定量 PCR方 法（灵敏度10-15 IU/mL）的最低检出限1 1. EASL HBV Guidelines. J Hepatology. 2009;50:277-242
CHB疾病管理:治疗目标
HBeAg消失
HBeAg 血清学转换
ALT正常
目前在国内唯一满足治疗指南和专家共识的HBV DNA和 HCV RNA检测试剂
HBV DNA 监测的重要性 口服核苷（酸）类似物疗效评估
开始治疗--- 基于 HBV DNA、 ALT水平和疾病发展阶段
治疗第12周评估是否存在原发性无应答 (较基线下降<1 log)
治疗第24周评估
完全病毒学应答
<60 IU/mL
COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV Test, v2.0
检测灵敏度 线性范围 检测基因型 检测样本量
Sample Type SFDA注册证
COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV Test, v2.0 20 IU/mL 20 – 1.7 x 108 IU/mL A-H 650 mL 血清或EDTA抗凝血浆
不同的基因型具有不同地域分布 我国主要是B\C型为主，偶有A型 北方－C型
HBV基因分型检测临床意义
特征
感染性 HbeAg阳性率 HbeAg自然清除时间 HBV DNA载量
致病性 HCC发生率 干扰素治疗完全应答率 抗病毒治疗效果 肝癌手术治疗预后 癌栓栓塞治疗效果
基因型
B型
C型
低 低 短 低 轻 低（低年龄组高） 高 高 好 好
什么是分子诊断
在临床上应用核酸（DNA/RNA) 和分子生物 学技术, 在基因水平诊断和监控疾病情况 和疗效，评估疾病的检测方法。
分子技术在乙肝诊断与治疗中应用
HBV 分子诊断的 临床应用
高灵敏度 HBV DNA定量
HBV 感染监测 药物疗效检测 感染早期检测
HBV 基因分型
病情预后发展 检测 抗病毒药物效 果预测